第31章 RNA的生物合成和 与加工 扬州大学《生物化学》课件.ppt

第三十六章 RNA的生物合成和加工 ;转录(transcription)： 以DNA单链为模板，NTP为原料，在DNA依赖的RNA聚合酶催化下合成RNA链的过程。 转录的条件： ;DNA复制与转录的比较;◆几个基本概念;模板链：反意义链（antisense strand，(-)链）—— 以该链中的DNA碱基顺序指导RNA的合成即被转录的那条DNA链。; （一）RNA聚合酶——依赖DNA的RNA聚合酶（DNA-dependent RNA polymerase,DDRP）;1、大肠杆菌RNA聚合酶的组成 （1）全酶(holoenzyme) 由4种(5个)亚基α2ββ’σ组成 还含2个Zn原子 （2）核心酶(core enzyme) α2ββ’ ，参与转录的全过程 （3）σ亚基（起始亚基） 亦称σ因子（σ factor)—转录辅助因子 识别启动子 ω亚基功能未知;全 酶 核 心 酶 ;模板识别;转录泡;2. 真核细胞RNA聚合酶 在DEAE-Sephadex柱上的洗脱次序称为酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ ;类型 Ⅰ Ⅱ Ⅲ ;（二）启动子（promoter）和转录因子1、启动子 RNA聚合酶全酶识别、结合、开始转录的一段DNA序列。（双链）2、转录因子RNA聚合酶起始转录所需要的辅助因子（蛋白质）;足迹法（Footprinting） 足迹法技术用于测定与特殊蛋白质结合的核酸顺序。 如该技术提供了RNA聚合酶与启动子之间相互作用的信息并确定了作用位点（启动子）的核苷酸顺序。 ;通过核酸酶消化分离Pr结合的DNA片段;;3、原核生物启动子的特点:(1)DNA序列在转录起始点的5’端区(上游区)(2)-10bp处 -TATAAT- (Pribnow box)(3)-35bp处 -TTGACA-;原核生物的转录起始;RNA聚合酶保护区;大肠杆菌启动子共有序列的功能; RNA聚合酶σ因子 识别及结合启动子，延长时脱落 不参与转录过程，是转录辅助因子 识别位点：启动子-35区、-10区;原核生物有多种σ因子识别不同的启动子 一般情况下起作用的是---σ70 ;α;结合过程： 闭和的启动子复合体 RNA聚合酶（全酶）中的σ因子在DNA双链 上迅速、随机滑动，寻找到启动子-35区， 形成疏松的复合物，DNA双链未解开。 开放的启动子复合体 RNA聚合酶（全酶）移向-10区和转录起始 ;延长---- 转录泡RNA聚合酶（核心酶）　◆与DNA模板紧密结合，沿3’ 5’方向移动　◆解旋作用：DNA解开　◆聚合功能（不具外切酶功能） 杂交螺旋 ◆ RNA-DNA形成杂交螺旋 ◆ 转录产物RNA沿5’ 3’方向延长;4、真核生物的起始——较原核生物复杂 ◆顺式作用元件 (启动子/增强子) ◆转录因子(transcription factor,TF) RNA聚合酶Ⅱ所需的转录因子 ---转录因子Ⅱ （TFⅡ）;启动子 上游启动子元件(upstream promotor elements,UPE) 增强子：远离转录起始点（1~30kb） 增强启动子转录活性DNA序列 作用与方向、距离无关 沉默子：负性调节元件，起阻遏作用 ;反式作用因子(trans-acting factor); A 类别Ⅰ启动子（有种属特异性） ——控制rRNA前体基因的转录 近启动子-40～+20：决定转录起始的精确位置 远启动子-180～-107：影响转录的频率 （核心启动子和上游控制元件） 需要两种转录因子的参与;B 类别Ⅱ启动子 基本启动子（basal promoter） 起始子（initiator） 上游元件（upstream element） 应答元件（response element） 需要多种转录因子的参与; TATA框（ –25至-30bp ） 与RNA聚合酶的定位有关 DNA双链解开的部位 辅助因子为通用转录因子 （general transcription factor，GTF）以TFIIX来表示，其中X按先后发现次序用英文命名。;Y为嘧啶碱;;;;转录激活因子的诱导调节 磷酸/去磷酸化（主要是共价修饰）; 类别Ⅲ启动子 为RNA聚合酶III所识别 部分是下游启动子/内部启动子 tRNA 基因：基因内部两个控制元件（box A、box B） 5S rRNA基因：+50～+83（3个控制元件box A、中间元件、b