抗人igm抗体抑制鼻咽癌hne 1细胞裸鼠成瘤的机制研究-mechanism of anti-human igm antibody inhibiting tumor formation in nude mice with nasopharyngeal carcinoma hne 1 cells.docxVIP

- - PAGE 10 - 抗人 IgM 抗体抑制鼻咽癌 HNE-1 细胞裸鼠成瘤的机制研究 摘 要 目的：目前，随着各种诊断方式的更新及治疗方法的进步，鼻咽癌的5年生 存率有了一定提高但是仍不理想，早期诊断仍较困难，治疗效果仍欠佳。 在前期研究中，我们发现免疫球蛋白（Immunoglobulin，Ig）M在多种头颈 部肿瘤包括鼻咽癌中存在广泛表达，利用抗人IgM抗体干预后，人鼻咽癌 HNE-1细胞裸鼠移植瘤的生长受到明显抑制，并能促进其凋亡。Ig对人鼻 咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤具有生长因子样作用，能够促进其生长，但其 具体机制还尚不明确[1,2]。随着对肿瘤形成机制的深入研究，人们发现血管 生成与肿瘤的生长转移关系密切，抗血管生成治疗也成为肿瘤治疗中的重 要组成部分之一。本实验是在前期研究的基础上，获取人鼻咽癌HNE-1细 胞裸鼠移植瘤组织标本，通过检测移植瘤组织增殖指标以及血管生长相关 指标，生存素-Survivin、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen， PCNA）、 血管 生 成素 -2 （angiopoietin ，Ang-2 ），移 植 瘤 内微 血 管密 度 （microvessel density，MVD），进一步探讨抗人 IgM抗体抑制人鼻咽癌 HNE-1细胞裸鼠成瘤的可能机制，为鼻咽癌发病机制的研究及临床治疗方 案提供新的思路。方法：取人鼻咽癌HNE-1细胞裸鼠移植瘤组织，用含1% 蜂蜡的石蜡包埋组织，轮转式切片机将其切成4μm厚的病理切片，应用免 疫 组 化 链 霉 亲 和 素 - 生 物 素 化 过 氧 化 酶 复 合 物 染 色 法 （Streptoavidin-biotin-enzyme complex，SABC）检测瘤体组织中Survivin、 PCNA 、 Ang-2 表达情况；应用免疫组化 链霉亲和碱性磷酸酶 染色法 （Streptavidin-Alkaline Phosphatase，SAP）检测CD31标记的移植瘤内微血 管，并计数MVD表达情况。（1）Survivin，PCNA：阳性染色呈黄色至棕黄 色，前者主要位于胞膜或胞质；后者阳性染色部位主要位于细胞核。每张 染色切片在Olympus BH2显微镜下，低倍镜（×100）随机选择染色明显的 5个视野，高倍镜（×400）下采图，共5张切片，每张切片采集5张图片， 采用Image-pro Plus6.0软件对Survivin，PCNA阳性染色的病理图片作免疫组 化半定量分析，记录平均光密度值。（2）Ang-2：Ang-2阳性染色呈棕黄色， 主要位于细胞浆或细胞膜。由两位医师分别观察每张切片，选择有代表性 的区域，用OLYMPUS BH2显微镜在高倍镜下（×400）对切片进行摄像， 共5张切片，每张切片采集5张图片，采用Image-pro Plus 6.0软件对采集的 Ang-2阳性染色切片作免疫组化半定量分析，记录平均光密度值[16]。（3） MVD计数：阳性染色（CD31标记）呈鲜红色至红色颗粒，主要位于血管 内皮细胞膜，阴性染色为蓝色。计数方法参考Weidner[18]的方法进行，先寻 找染色清楚的瘤体内微血管，在染色密集区域寻找（低倍镜，×40），然后 在200倍镜（20×10）下计数肿瘤内的微血管数目，包括毛细血管和静脉数 目，瘤旁组织内微血管不计数，记录5个视野内的微血管数，取平均值，结 _ 果以（x± s）表达。统计数据运用SPSS16.0 for windows软件作统计学分析， P0.05显示差异有统计学意义。结果：（1）Survivin、PCNA表达情况，抗 人IgM抗体干预实验组Survivin、PCNA的平均光密度值分别为（0.153± 0.009）、（0.084±0.025），IgG组Survivin、PCNA表达的平均光密度值为 （0.221±0.019）、（0.149±0.016），PBS对照组Survivin、PCNA表达的平均 光密度为（0.246±0.021）、（0.163±0.018），实验组（抗人IgM抗体干预） 组Survivin和PCNA阳性表达的结果显著低于IgG组和PBS对照组，差异有统 计学意义（P0.05）。 （2） Ang-2、MVD表达情况，抗人IgM抗体干预组 Ang-2表达的平均光密度值为（0.121±0.021），IgG组Ang-2表达的平均光 密度值为（0.188±0.013），PBS对照组的平均光密度为（0.196±0.005）， 实验组（抗人IgM抗体干预）Ang-2阳性表达的结果显著低于IgG组和PBS 对照组，差异有统计学意义（P0.05）；MVD表达情况，抗人IgM抗体干预