蓝莓对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞瘦素 jak2stat3表达的影响-effects of blueberry on expression of leptin jak 2 stat 3 in rat hepatic stellate cells stimulated by acetaldehyde.docxVIP

蓝莓对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞瘦素、JAK2/STAT3 表达的影响专业：传染病学研究生：许珍导师：吴亚云 教授摘要目的 选择乙醛作为大鼠肝星状细胞系（HSC-T6）的刺激因子，观察大鼠蓝 莓血清对肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）的增殖、对瘦素（Leptin，LP） 和 JAK2/STAT3（Janus kinase 2-signal transducer and activator of transcription 3,JAK2/STAT3）通路的影响，探讨蓝莓对肝纤维化的保健价值。方法 实验分组：对照组、生理盐水组、低剂量蓝莓组、中剂量蓝莓组和高 剂量蓝莓组。首先制备高、中、低剂量组的大鼠蓝莓血清，用 G-DMEM 将蓝莓 血清稀释成终浓度为 10%的培养液，于 37℃、5%CO2 环境中干预 HSC。光学显 微镜观察 HSC 的形态。用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolylium，MTT)比色法检 测 200μmol/L 乙醛对 HSC 的影响及不同浓度的大鼠蓝莓血清对 HSC 增殖的影 响。免疫组织化学法检测各组 HSC 内瘦素、JAK2、STAT3 蛋白的影响。结果 200μmol/L 乙醛干预 HSC 24h 后，可显著促进 HSC 增殖（P0.05）， 并促进 HSC 表达瘦素、JAK2、STAT3（P0.05）。低、中和高剂量的大鼠蓝莓血 清预处理 HSC 24h 后，HSC 的增殖被抑制（P 0.05）；较低、中剂量蓝莓血清， 高剂量蓝莓血清的抑制作用更加明显（P0.05）。与生理盐水组相比，高剂量蓝 莓血清可抑制 HSC 表达瘦素、JAK2 和 STAT3（P0.05），而低、中剂量蓝莓血 清的抑制作用没有统计学意义，低、中、高剂量蓝莓组之间的差异也无统计学意 义。结论 200μmol/L 乙醛可显著促进 HSC 增殖，并促进 HSC 瘦素、JAK2 及 STAT3 的表达。蓝莓能抑制 HSC 的增殖，其抑制作用可能是通过抑制 HSC 瘦素 表达、阻断 HSC JAK2/STAT3 信号转导来实现。关键词：肝星状细胞；乙醛；瘦素；Janus 激酶 2（JAK2）；信号转导和转录 激活因子 3（STAT3）；蓝莓前言肝纤维化（liver fibrosis）是多种慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段，目前认 为肝星状细胞的激活是肝纤维化形成的关键。各种致病因素引起的肝损伤、释放 的细胞因子，如转化生长因子β(transfer growth factor, TGF-β)、血管紧张素、瘦 素等，都可通过各种信号转导途径使肝星状细胞激活[1、2]。Potter[3]发现分离培养的大鼠HSC可大量表达瘦素mRNA和蛋白。目前，有关 瘦素致肝纤维化的作用机制有两种不同观点，一种认为激活的HSC表达瘦素和瘦 素受体，瘦素作为一个独立的致肝纤维化因子，其作用不依赖于转化生长因子- β1 (Transforming growth factoβ1,TGF-β1) [4]；另一种认为HSC不表达瘦素受体， 瘦素通过作用于窦内皮细胞上的瘦素受体，诱导窦内皮细胞分泌TGF-β1，促进 胶原合成[5]。研究表明，HSC内瘦素后信号转导途径主要涉及JAK/STAT途径（Janus kinase-signal transducer and activator of transcription, JAK/STAT) [6]。但有 关JAK/STAT途径与肝纤维化发生机制的研究并不多见。乙醛是乙醇经肝脏 P450（CYP）代谢的主要产物，能刺激HSC胶原合成， 调节细胞外基质（extracell matrix,ECM）和基质金属蛋白酶（martixmetall-oproteinases, MMP），并促进TGF-β1的产生。很多学者根据酒精性肝纤维 化的形成机制及乙醇的代谢途径，建立乙醛刺激肝星状细胞增殖的体外模型[7]。 从慢性肝病发展到肝纤维化、肝硬化甚至肝癌，整个病程相对较长，食疗在 疾病进展中的作用值得高度重视。蓝莓属杜鹃花科（Ericaceae），富含抗氧化剂、细菌生长抑制剂、鞣花酸、鞣花单宁、叶酸、花色素苷、类黄酮等化合物，有助 于清除体内自由基、抑制与逆转人体衰老[8]。因此蓝莓最为一种保健食品，前景 十分广阔。本课题组的前期研究已发现蓝莓可对抗脂质过氧化、预防急性肝损伤、 促进HSC的凋亡[9、10、11]。本研究将从细胞因子和信号传导通路的角度出发，以乙 醛为刺激因子，观察蓝莓对活化的HSC内瘦素、JAK2、STAT3表达的影响，进一 步探讨蓝莓对肝纤维化的保健机制。1.材料1.1 实验动物材料与方法健康 SD 大鼠 20 只（由贵阳医学院动物实验室提供），清洁级，体重 400 克±50 克