类风湿关节炎患者cd4cd25t细胞foxp3基因启动子区甲基化水平分析-methylation level analysis of foxp 3 gene promoter region in cd 4 cd 25 t cells of rheumatoid arthritis patients.docxVIP

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2018-05-29 发布于上海
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类风湿关节炎患者cd4cd25t细胞foxp3基因启动子区甲基化水平分析-methylation level analysis of foxp 3 gene promoter region in cd 4 cd 25 t cells of rheumatoid arthritis patients

类风湿关节炎患者CD4+CD25+T细胞FOXP3基因启动子区甲基化水平研究摘要目的：检测类风湿关节炎（RA）患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞FOXP3的表达，研究FOXP3基因启动子区甲基化水平，探讨其在RA发病中的作用。方法：按入组标准收集RA患者25例，其中包括初发活动组RA患者（16例）和非活动组患者（9例），以健康体检者（n=25）为对照。用DAS28方法评价RA临床疾病活动度。以流式细胞术测定外周血CD4+CD25+T细胞FOXP3的表达。采用密度梯度离心法分离RA患者组和对照组外周血单个核细胞，应用免疫磁珠法分选CD4+CD25+T细胞及重亚硫酸盐处理测序法检测RA患者与正常人CD4+CD25+T细胞中FOXP3基因启动子序列甲基化水平的差异。结果：1．流式细胞仪分析显示，活动组和非活动组RA患者以及正常对照组CD4+CD25+FOXP3+T细胞表达百分率分别为2.39%±0.12、3.77%±0.26、4.84%±0.21，CD4+CD25+FOXP3+T细胞表达百分率在RA活动组和非活动组患者比正常对照组显著减少（p0.05）。2．活动组RA患者CD4+CD25+FOXP3+T细胞表达百分率与DAS28评分呈负相关。3．RA患者CD4+CD25+T细胞FOXP3启动子区甲基化水平高于正常对照组，结果有统计学意义（P0.05）。结论：1．与正常对照组相比，RA患者外周血中CD4+CD25+FOXP3+T细胞表达百分率明显降低，说明RA患者外周表达FOXP3的调节性T细胞比例下降，参与RA的发病，并且与疾病的活动度有关。2．RA患者CD4+CD25+T细胞FOXP3基因启动子区-67、-74位点甲基化水平较正常对照组升高，提示启动子区甲基化水平可能与RA的发病有关，因此针对此机制设计出有效的干预手段，为类风湿关节炎的治疗提供了新的理论基础。关键词：类风湿关节炎；CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞；重亚硫酸盐测序法DetectthemethylationstatusoftheFOXP3genepromoterinCD4+CD25+TcellofpatientswithrheumatoidarthritisAbstractObjective:Todetecttheexpressionoffoxp3onCD4+CD25+regulatoryTcellinperipheralbloodofpatientswithrheumatoidarthritis,andtodetectthemethylationstatusoftheFOXP3genepromoterinperipheralbloodCD4+CD25+regulatoryTcellofpatientswithrheumatoidarthritisanditsroleinthepathogenesisofRA.Method:25RApatientsand25healthycontrolswererecruitedaccordingtothecollectionstandard,whichinclude16new-onsetpatientswithactiveRAand9patientswithinactiveRA.ThediseaseactivitywasmeasuredbytheDAS28.LevelsofFOXP3inCD4+CD25+Tcellassaywasanalyzedbyflowcytometry.PBMCsofRApatientsandhealthycontrolswereisolatedbyFicoll-Hypaquedensitygradientcentrifugation.ThemethylationstatusdifferenceoftheFOXP3promoterinPBMCsbetweenRApatientsandhealthycontrolswasdetectedbybisulfitesequencingtechnology.Results：ItwasshowedbyflowcytometrythatthepercentageofCD4+CD25+FOXP3+Tcellsinpatientswithactive，inactiveRAandcontrolswas2.39%±0.12、3.77%±0.26、4.84%±0.21.ThepercentageofCD4+CD25+FOXP3+TcellinactiveandinactiveRApatientsweresignificantlylowerthanthoseofhealthycontrols（p0.05）.ThepercentageofCD4+CD25+FOXP3+Tc