利用玉米秸秆半纤维素降解产物发酵产乙醇菌株筛选-screening of ethanol-producing strains by fermentation of corn stalk hemicellulose degradation products.docxVIP

摘 要摘 要煤炭、石油资源枯竭，地球污染在日益加重，人类现在亟需寻找一种新的能源以便 能够改变目前这种严峻的能源危机。乙醇作为一种清洁高效的能源，早已被世界各国所 关注。地球上每年都产生数以万计的木质纤维素，这也为发展燃料乙醇产业提供了丰富 的原材料。目前，国内纤维素作为发酵乙醇的原料，其利用率远低于国外最好水平，主 要原因是产乙醇菌株对秸秆中半纤维素降解产物木糖的糖醇转换率较低。本研究对从保定周边秸秆堆积场所采集到的样品进行高效利用木糖产乙醇菌株的 筛选，同时还筛选得到产半纤维素酶菌株，并以玉米秸秆稀酸水解液和半纤维素酶酶解 液为原料，进行了乙醇发酵的初步探索和比较。分离、筛选得到6株可利用木糖发酵产乙醇的菌株，初始木糖40.0 g/L，(NH4)2SO4 5.0g/L，KH2PO4 1.0 g/L，酵母粉 0.5 g/L，MgSO4·7H2O 0.5 g/L，pH6.5条件下，利用木糖 发酵产乙醇能力在10.46g/L-12.38g/L之间，木糖利用率在68.75%-79.17%之间，乙醇得率 在0.35g/g-0.41g/g之间。对发酵时间和培养基成分优化后，初始性能最佳的菌株M-105 在木糖50.0 g/L，(NH4)2SO4 5.5 g/L，KH2PO4 1.0 g/L，酵母粉 1.5 g/L，MgSO4·7H2O 2.0 g/L，pH6.5条件下发酵60h，乙醇产量和木糖利用率分别达23.37g/L和98.85%，乙醇得率 达到了0.471g/g。筛选得到16株产半纤维素酶菌株，其中只有3-B009菌株酶活性较稳， 且酶活力相对较高 ； 在对其进行 发 酵 条 件 优 化 后 ， 半 纤 维 素 酶 活 力 达 341.94U/mL(17097U/g)。在此基础之上，用 2%的稀硫酸对玉米秸秆进行了预处理，脱毒得到玉米秸秆水解 液，HLPC-示差折光法测得浓缩水解液木糖含量为 46.62g/L，不含葡萄糖。利用 M-105 菌株发酵水解液，乙醇产量和木糖利用率分别为 10.29g/L 和 61.39%。利用 3-B009 发酵 所得半纤维素酶粗酶液处理玉米秸秆，优化酶液用量后，酶解 48h，木糖含量 5.093g/L。 半纤维素水解率较低，尚无法直接用于发酵。基于 26S rDNA D1/D2 结构域序列的系统发育分析和初步鉴定表明，高效发酵木糖 产乙醇的菌株 M-105 为热带假丝酵母(Candida tropicalis)；在土豆汁木糖培养基培养 5d 可形成假菌丝。根据基于 16S rDNA 序列的系统发育分析，半纤维素酶产生菌 3-B009 属于类诺卡氏属(Nocardioides)；高氏一号培养基 28℃培养 3d，基丝断裂、形成断裂小 体。I摘 要关键词乙醇玉米秸秆木糖半纤维素酶热带假丝酵IIAbstractAbtractAs coal and oil resources are drying up, and the environment pollution is becoming more and more serious, human now need to find alternative energies in order to change the current serious energy shortage situation. As a kind of clean and efficient energy, ethanol has long been the concern of the countries all over the world. Tens of thousands of lignocelluloses were produced every year in the world, which provide abundant raw materials for the development of fuel ethanol industry. But the utilization rate of raw material is far lower than the best level of the foreigners now, one of the important reason is that alcohol conversion rate of the strains from hemicellulose degradation products of xylose sugar is low.In this study, strains of efficient using xylose to produce ethanol were isolated a