酶工程4 第四章：酶和 与细胞的固定化.ppt

第四章酶与细胞的固定化;工欲善其事，必先利其器;4.1　引言;设计一种方法，将酶束缚，与整体相(或整体流体)分隔开，能进行底物和效应物(激活剂或抑制剂)的分子交换。像一般化学反应的固体催化剂，既具有酶的催化特性，又具有化学催化剂能回收、反复使用,生产工艺可以连续化、自动化。;水溶性酶;固定化酶的优点;固定化酶的缺点;;二、固定化酶的制备原则;三、固定化酶的方法;1、载体结合法;1) 物理吸附法;特点;2）离子结合法;特点;1969年最早应用于工业生产的固定化氨基酰化酶就是使用多糖类阴离子交换剂DEAE-葡聚糖凝胶固定化的。;3) 共价结合;两类一是载体自身具有功能团，经活化后与酶结结合。另一类则是用双功能团活化载体，再与酶结合。;a 重氮法;R0H纤维素或其它多糖类载体，后者β-硫酸酯乙砜基苯胺（SESA）;酶蛋白中酪氨酸含量较高的木瓜蛋白酶、脲酶、葡萄糖氧化酶、碱性磷酸酯酶、β-葡萄糖苷酶等与重氮化载体连接，获得活性较高的固定化酶。;B、迭氮法;C　溴化氰法;Axen等开发的方法，它不局限于酶，可以广泛应用于机体成分的固定化。异脲型是主要生成物。此法能在非常温和条件下与酶蛋白的氨基发生反应，它已成为近年来普遍采用的固定化方法，尤其是溴化氢活化的琼脂糖已在实验室广泛用于制备固定化酶以及亲和析的固定化吸附剂。;D、烷基化法;;共价结合法的特点;产品介绍;2 交联法;特点;;3、包埋法; 特点;1）凝胶包埋法;;2）半透膜包埋法（微囊型）;A )界面沉淀法;B）界面聚合法 ;C) 二级乳化法;D)脂质体包埋法;4 热处理法;理想的固定化方法;方法比较