缬沙坦预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤保护作用.docVIP

缬沙坦预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤保护作用 　　【摘要】目的:探讨缬沙坦预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法:常规方法培养心肌细胞，培养72小时后，分为三组：正常对照组、心肌细胞缺氧/复氧损伤组、缬沙坦预处理后心肌细胞缺氧/复氧损伤组。分别观察心肌细胞结构，测定心肌细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）水平。结果:与对照组比心肌细胞缺氧/复氧损伤组细胞存活率明显下降、培养液中LDH、MDA含量明显增高，SOD含量明显下降；与心肌细胞缺氧/复氧损伤组比，缬沙坦预处理组心肌细胞存活率明显提高，培养液中LDH、MDA含量明显下降、SOD含量明显上升。结论 缬沙坦通过抗氧化、抗脂质过氧化反应，清除氧自由基对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤有保护作用。 　　【关键词】缬沙坦；心肌细胞；缺氧复氧；预处理 　　【中图分类号】R322.11;R541.4【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2011）08-0582-02 　　Protective effects of Valsartan pretreatment on hypoxia/reoxygen injury in neonatal SD rat cardiomyocytes 　　Wang Liang1 Dai Zhenhua2 Chen Peng3 　　【Abstract】Objective:To observe protective action of Valsartan pretreatment on hypoxia/reoxygen injury in neonatal SD rat cardiomyocytes and to investigate the mechanism.Methods:To establish a model for primary culture of cardiomyocytes injuried by hypoxia/reoxygen. The morphology of cardiomyocytes was observed, and cardiomyocytes fraction surviving were measured, and the activity of lactate dehydrogenase （LDH）, malondialdehyde （MDA）, superoxide dismutase （SOD） were assayed.Results:Valsartan pretreatment on hypoxia/reoxygen injury in neonatal SD rat cardiomyocytesinhance cardiomyocytes fraction surviving （P[1]。目前已有研究证明，Ang lI受体拮抗剂缬沙坦通过选择性拮抗AT受体，激活AT受体及直接作用，产生抗缺血再灌注损伤心律失常，减少梗死面积，减轻心肌顿抑等多种心肌保护作用[2]。但缬沙坦对体外培养的心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响尚未见报道。 我们通过乳鼠心肌细胞原代培养，建立心肌细胞缺氧/复氧损伤的模型，观察缬沙坦对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用，在细胞水平探讨它对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用和可能的机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 1～2 d龄SD大鼠，雌雄不拘，共260只。 　　药品及主要试剂。药品：缬沙坦（瑞士原粉，诺华公司惠赠）。试剂：DMEM/F12（1∶1） 培养基（Hyclone公司，美国）， 5-溴脱氧尿嘧啶（5-Brdu，Amresco公司，美国），噬哇蓝（MTT, Amresco公司，美国），LDH检测试剂盒（南京建成生物工程研究所），MDA测试试剂盒（南京建成生物工程研究所），SOD测试试剂盒（南京建成生物工程研究所）。 　　1.2 研究方法 　　1.2.1 乳鼠心肌细胞的原代培养:取新生1～2 d SD大鼠20只，开胸取出心脏，将其剪成lmm3大小的碎块，用酶消化法[3]制成细胞悬液，通过150目孔径的不锈钢网滤过，接种到直径75cm2的培养瓶中，置入CO2培养箱中（37℃, 5% CO2, 95%空气），静置90 min差速贴壁，小心吸出细胞悬液并加入0.1 mol/L的5-溴脱氧尿嘧啶（5-Brdu），混匀，台盼蓝计数。按5×108个/l接种于25cm2培养瓶或96孔板等，继续置入CO2培养箱中培养，24h后更换含血清的DMEM/F12培养基。待细胞融合出现整体搏动换为无血清培养基，72h后开始实验。 　　1.2.2 实验分组:实验按随机原则,分为3组。正常对照组：正常培养，无特殊处理；