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肾穿活检组织标本制作与染色余姚市人民医院 一﹑取材 肾活检标本经皮质穿刺取检,分皮质和髓质,在解剖显微镜下,肾皮质组织色较淡,肾小球为如针尖大小的红色小点,不规则分布。穿刺所得的组织,一般包括以下几种成分:皮质组织;皮髓交界组织;皮质-髓质-皮质组织。 固定固定液:? 常规:10%中性福尔马林。? 电镜: 3%戌二醛。固定时间:最好不低于8小时。脱水、包埋、切片 随常规脱水机脱水,尽量用小包埋模块包埋,以利于连续切片。切片厚度1-2um,烤片温度60℃。1小时。 HE染色:观察组织学和细胞学形态,通过它能显示整个疾病的全貌,明确病变的性质和分布的特点 染色结果 肾小球轮廓清晰,细胞核、质蓝红对比鲜明,各种细胞成分着色鲜艳。 特殊染色 六氨银染色 肾小球肾炎的病变主要表现在肾小球,尤其是肾小球基膜的改变。常规HE染色不能清晰地显示基膜,主要通过PAMS染色才能将基膜清晰地显示出来。 染色原理:肾小球基膜富含粘多糖,必须经过氧化才能暴露醛基,醛基把六胺银还原为黑色的金属银。 试剂配制 (1)1%高碘酸水溶液 (2)5%铬酸水溶液 (3)2%草酸水溶液 (4)3%六次甲基四胺水溶液 (5)5%硝酸银水溶液 (6)5%硼砂水溶液 (7)0.1%氯化金水溶液 (8)3%硫代硫酸钠水溶液 方法 (1)1%高碘酸氧化10min,蒸馏水洗。 (2)5%铬酸氧化20min,蒸馏水洗。 (3)2%草酸泡洗 1min,蒸馏水洗三次。 (4)新鲜配制六胺银溶液(六胺银染液:3%六次甲基四胺 水 20ml , 5%硝酸银 1ml , 四硼酸钠 2.4ml)用50ml规格的染色玻璃缸750W微波炉的中低档预热。 (5)将切片置入六胺银溶液中于60度水浴箱中孵育15~25min (6)蒸馏水漂洗3次。 (7)0.1%氯化金调色1~2min,蒸馏水洗。 (8)3%硫代硫酸钠处理1~2min,蒸馏水洗。 (9)复染苏木素,伊红 (10)常规脱水,中性树胶封固 Masson三色染色 Masson三色染色主要是用来观察肾小球嗜复红蛋白沉积物(免疫复合物)及肾脏内胶原纤维增生等。我科采用改良后方法,通过组织切片的补充固定,试剂浓度的改良组合、调整染色时间。对肾穿活检切片进行了新旧两种方法的试验比较,取得了较为满意的效果 高碘酸-无色品红 在肾小球疾病中,常导致肾小球基底膜的改变,HE染色无法清晰显示基底膜,PAS对显示基底膜的诊断有一定意义 * *
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