分步发酵豆粕制备大豆肽工艺分析-process analysis of soybean peptide preparation by fermentation of soybean meal step by step.docxVIP
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分步发酵豆粕制备大豆肽工艺分析-process analysis of soybean peptide preparation by fermentation of soybean meal step by step
学位论文独创性声明本人声明,所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中引用 他人的成果,均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属于他人的 任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果,与我一同工作 的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。论文作者签名:日期:年月日学位论文知识产权权属声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属山东轻工业学 院。山东轻工业学院享有以任何方式发表、复制、公开阅览、借阅以及申请专利等权利,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,本人离校后发表 或使用学位论文或与该论文直接相关的学术论文或成果时,署名单位仍然为山东轻工业学院。论文作者签名:日期:年月日 导 师 签 名:日期:年月日第 1 章 绪论1.1 豆粕及豆粕的固态发酵1.1.1 豆粕简介豆粕粗蛋白含量丰富,氨基酸组成合理,此外,含有脂肪、碳水化合物、维生素等 其他营养物质和许多能产生生物效应的活性物质,如大豆低聚糖、大豆异黄酮、大豆活 性肽等,是一种良好的植物源蛋白饲料[1]。豆粕中含有多种抗营养因子(anti-nutritional factors,ANF)[2],如胰蛋白酶抑制因子、 脲酶等,研究发现,这些抗营养因子影响了畜禽对营养成分的消化、吸收,影响动物的 健康及生产性能。这就需要对抗营养因子进行处理,从而提高豆粕的消化率,提高营养 价值,目前为止常用的加工方法概括为:物理方法、化学方法以及生物学方法[3]。 1.1.2 豆粕固态发酵固态发酵技术在生产和生活中有着广泛的应用。区别于液态发酵,固态发酵物料的 水活度比较低,难于进行发酵基质的混合以及扩散,浓度梯度易于形成。和液态培养相 比,通过固态培养的霉菌更容易产生孢子,以及产生更多的酶和生成其他次级代谢产物。固态发酵技术得到了广泛的应用。在酿酒行业,最典型的应用就是采用固态发酵技 术生产酒曲以及固态发酵的方法酿酒。在食品工业中,通过面包酵母的固态发酵生产面 包、利用多种乳酸菌的混合作用固态发酵生产干酪。此外豆酱、酱油、豆豉以及食用菌 的生产中都广泛应用了固态发酵技术。在农业生产中,固态发酵技术广泛应用于饲料添 加剂、菌体蛋白以及各种酶类饲料的制备和生产。通过微生物发酵的方法处理豆粕,豆粕中的大分子蛋白被蛋白酶等水解成小分子的 肽,蛋白质的利用率得到了提高[4]。大豆肽具有良好的理化性质,在食品和医药方面有 着非常广阔的应用前景,发酵豆粕在动物保健,尤其是在调节幼龄动物的肠道微生物方 面效果良好,广泛应用在畜牧及饲料工业界[5-8]。此外,微生物发酵豆粕,不需要加热 或添加化学试剂,饲料营养成分被破坏的可能性小,应用安全,实用性强。用于豆粕固态发酵的微生物可以是:黑曲霉、米曲霉、酵母菌、枯草芽孢杆菌和乳 酸菌等[9-12]。不同的微生物其代谢产物不同,其中,米曲霉主要生成的酶类为蛋白酶、 淀粉酶和糖化酶等[13]。因此,在豆粕发酵前,需要对用于发酵的微生物进行筛选和选育 [14]。1.2 蛋白酶的生产与应用1.2.1 蛋白酶的生产蛋白酶主要起到催化水解蛋白质以及多肽等的作用,目前常以最适 pH 为标准将其 分为碱性蛋白酶、中性蛋白酶和酸性蛋白酶[15]。蛋白酶是工业酶中用得最广泛的一种, 约占酶总量的 60%[16]。不同种类的蛋白酶通过微生物的发酵生产可以得到,酶制剂得 到了广泛的应用,酶的固定化研究也更为深入,人们更加重视通过发酵的方法制备所需 蛋白酶[17]。蛋白酶的制备受环境因子的影响。如:①pH 的影响。不同 pH 值的培养基所产生 的蛋白酶种类不同,所产蛋白酶的 pH 值一般相近与参加酶促反应的最适 pH 值[18,19]。②通风量的影响。深层培养的过程,需要通风搅拌,霉菌菌丝的生长和产酶量的多少受 到通风量的多少影响,通风量的多少在实际生产中要控制好,一方面要利于菌体的生长, 另一方面不会抑制蛋白酶的效果。③温度的影响。不同的微生物发酵产酶所需的最适温 度不同,菌体的生长、产酶的周期都会受到温度过高或者过低影响,这样不利于高活性 蛋白酶的产生[20]。此外,发酵培养基的组成及其他代谢产物的生成也会影响到蛋白酶的 发酵生产,实际生产中需要具体情况具体分析。1.2.2 蛋白酶的应用影响蛋白酶水解反应的因素很多,主要是:①温度的影响。反应速率会影响蛋白酶 的酶促反应温度,同时,随反应温度的升高和时间的累加而造成的酶蛋白变性也是影响 酶促反应温度的一个重要因素,工业生产中的温度调控要根据酶促反应时间的长短来确 定[21,22]。②pH 的影响。蛋白酶在一定的 pH 范围内保持稳定,这是受到分子结构和酶 分子中心构象不同以及反应微环境不同决定的,不同的酶促反应都有自己的
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