皮肤感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析及耐药基因的检测-analysis of drug resistance and detection of drug resistance genes of methicillin-resistant staphylococcus aureus in skin infection.docxVIP

论文独创性说明 本人申明所呈交的学位论文是在我个人在导师的指导下进行的研 究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我 一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说 明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 导师签名： 签字日期： 关于论文使用授权的说明 本人完全了解学校关于保留、使用学位论文的各项规定， （选择“同意/不同意”）以下事项： 1.学校有权保留本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅， 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文； 2.学校有权将本人的学位论文提交至清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入 CNKI《中国知识资源总库》或其 他同类数据库，传播本学位论文的全部或部分内容。 学位论文作者签名： 签字日期： 导师签名： 签字日期： 前言随着抗生素在临床的广泛应用，耐药菌株不断出现，且呈多重耐药性。自 1961 年发现第 1 株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ methicillin- resistant Staphylococcus aureus，MRSA）以来，MRSA 的检出率在世界范围内广泛传播，常造成暴发流 行，故被称为“超级细菌”[1]。根据 MRSA 的来源及基因型，可将其分为医院获得性 MRSA（ hospital- acquired MRSA，HA-MRSA）和社区获得性 MRSA（community- acquired MRSA， CA-MRSA）。医院获得性 MRSA 通常感染那些病情较重、年龄较大、皮肤上有伤口（如褥 疮）或有导管通到体内（如导尿管）的人，是患者医院获得性感染的主要致病菌， 健康人很少会被感染，MRSA 具有很高的病死率以及发病率，是外科手术切口感 染、皮肤感染和导管相关感染的主要病原菌[2，3]，其引起的感染。目前在国外大 型教学医院 MRSA 的检出率为 60%～80%[4]，中国细菌耐药监测研究组 2002～ 2003 年监测国内 14 家医院 MRSA 的检出率为 60.7%[5]。有学者认为，MRSA 所 致感染与乙型肝炎、获得性免疫缺陷综合征（AIDS ）同为当今世界三大感染性疾 病[6]。一般情况下，MRSA 易在皮肤伤口、呼吸道、气管切口部位以及正常皮肤定 植，人是而 MRSA 的主要储菌库[7]。Scanvic A[8]认为 MRSA 可长期定植于患者 体表，从而有可能引起其他患者 MRSA 的定植或感染。因此近年来，对于 MRSA 在正常皮肤的定植引起的感染近年来也逐渐引起关注。MRSA 对常用抗生素耐药性较高，对大多数药物呈现有耐药性[9-10]，具有明 显的多重耐药特征，仅对万古霉素、利福平敏感性较高，其敏感性分别为97%和 59%[11]，但此敏感性也因各地区差异而不同。目前的研究证实，MRSA 耐药机制主要是由于金葡菌表面青霉素结合蛋白（PBP）发生了变化所致。PBP 是抗生素与细菌结合的部位，介导细菌细胞壁合 成过程中肽聚糖的交联。敏感金葡菌细胞表面存在 4 种 PBPs，而 MRSA 增加了 一种分子量为 78，000 的 PBP，命名为 PBP2a，它与 ?-内酰胺类抗生素亲和力极 低。当 ?-内酰胺类抗生素存在的条件下，其他 PBPs 不能发挥作用，因此被抑制， 而 PBP2a 仍可发挥作用，继续完成细菌细胞壁的合成，使细菌得以生存[9]。已经 有足够的证据表明，编码 PBP2a 的基因是 mec，根据 PBP2a 只特异存在于 MRSA 而不存在于甲氧西林敏感金葡菌的原理，可以应用 PCR 技术扩增编码 PBP2a 的 mecA 基因来鉴定 MRSA[11-12]。PV 杀白细胞素（Panton Valentineleukocidin，PVL）是目前在 CA-MRSA 致病机制中研究较多的一种，通过 2 种分泌型蛋白的协同作用，能破坏宿主白细胞 和红细胞。PVL 主要作用于人体的粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、红细胞，导致 细胞膜出现孔隙和通透性改变从而发生细胞溶解；PVL 与靶细胞结合后，使细胞 膜钙通道快速开放，引起靶细胞活化[13]。粒细胞的活化激发了颗粒的胞吐作用、 白细胞介素和其它炎症介质的产生[14]，从而触发了一系列的瀑布效应：局部血管 扩张、趋化现象、更多的中性粒细胞浸润，继之出现降解酶的分泌、超氧离子的 产生，从而触发组织坏死。一直以来，人们认为 MRSA 主要引起医院内感染，但近年来 MRSA 造成的 社区感染呈明显上升状态。CA-MRSA 常伴发败血症和坏死性肺炎，但主要导致 皮肤和软组织的感染，在 2000 年以前该菌的发病率较低，只占葡萄球菌分