pi3knrf2通路在内毒素休克兔肾损伤中的作用-effect of pi 3k nrf 2 pathway on renal injury in rabbits with endotoxic shock.docxVIP

万方数据万方数据学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名： 日期： 年 月 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。本论文属于保密 ，在 年解密后适用本授权书。不保密 。（请在相对应的方框内打“√” ）学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 导 师 签 名 ： 日期： 年 月 日天津医科大学硕士学位论文天津医科大学硕士学位论文中文摘要肾脏是内毒素休克（endotoxin shock，ES）最容易累及的器官之一，其机制 不明，治疗棘手，目前尚无理想的预防和治疗途径，因此，深入探讨内毒素休 克肾损伤的机制，对预防和减轻急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）以改善 内毒素休克预后有着十分重要的临床意义。核因子 E2 相关因子-2/抗氧化反应元 件（NF-E2-related factor 2/ antioxidant response element，Nrf2/ARE）通路是体内 重要抗氧化反应通路，血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）是 Nrf2/ARE 下游重要的抗氧化蛋白[1]。我们前期研究发现，HO-1 在内毒素休克肾组织中表 达上调，对肾功能具有一定的保护作用[2]。现有研究认为，丝裂原活化蛋白激酶（ mitogen-activated protein kinases ， MAPK ）、 磷 脂 酰 肌 醇 3 激酶 （phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）)、蛋白激酶 C（protein kinase C ，PKC） 等信号通路分子广泛参与了 Nrf2 的活化和核转位过程[3]。关于 PI3K/Nrf2 信号通 路在兔内毒素休克肾损伤中的作用，目前尚未见报道。目的 探讨磷脂酰肌醇-3 激酶-NF-E2 相关因子 2 信号传导通路在内毒素休 克兔急性肾损伤中的作用。方法 健康清洁级雄性新西兰大白兔 50 只，体重 1.5～2.0kg，随机分为 5 组（n=10）：对照组（C 组）、渥曼青霉素（wortmannin）组（W 组）、二甲基亚 砜（dimthyl sulfoxide，DMSO）组（D 组）、内毒素休克模型组（L 组）和渥曼 青霉素+内毒素休克组（WL 组）。实验兔常规饲养一周，禁食 24 小时后用于实 验。采用耳缘静脉注射 20％乌拉坦（mg/L）5 ml/kg 方法麻醉后，行气管插管， 保留自主呼吸；左侧颈内动脉置入 24 号套管针，通过压力传感器连接监护仪， 连续监测动脉血压。稳定 30 分钟后，W 组、WL 组经兔耳缘静脉注射渥曼青霉 素 0.6 mg/kg（溶剂为 DMSO 0.08ml/kg），D 组注射 DMSO 0.08ml/ kg ，C 组、 L 组注射生理盐水 0.08ml/ kg。30 分钟后，L 组、WL 组静脉注射脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）5mg/kg（溶于 2ml 生理盐水），C 组、W 组和 D 组 注射生理盐水 2ml。注射脂多糖（或生理盐水）6 小时后，经颈内动脉取血 5ml， 及时离心，留取血清，用于测定血清肌酐（creatinine，Cr）和血清尿素氮（urea nitrogen，BUN）浓度；经膀胱留取尿液 5ml，用于测定尿 α1-微球蛋白（urinary α1- microglobulin，α1-MG）浓度；处死兔，留双肾组织，右肾用 10%福尔马林 溶液浸泡，苏木素伊红染色，用于观察肾组织病理学改变，并进行肾损伤评分I（histological scores of kindey，HSK）；左肾液氮速冻后-80℃保存，采用硫代巴比妥酸法测定肾组织丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量，黄嘌呤氧化酶法 测定超氧化物岐化酶（superoxide dismutase，SOD）活性，逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）法检测肾组织中 Nrf2 mRNA 及 HO-1 mRNA 基因的表达情况，蛋白印迹（Western blot）法检测肾组 织 p-Akt 蛋白、Nrf2