一个蓝藻ndhq亚基的筛选 鉴定和功能研究-screening, identification and functional study of a cyanobacteria ndhq subunit.docxVIP

上海师范大学硕士学位论文目录3.3NdhQ是稳定NDH-1L复合体所必须293.4NdhQ缺失抑制细胞呼吸313.5NdhQ与NdhP共同稳定NDH-1L复合体344.讨论36参考文献42攻读学位期间取得的研究成果55致谢56论文独创性和使用授权声明58缩写BNbluenativeCCMCO2concentratingmechanismCETcyclicelectrontransferCHAPS3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]-l-propanesulfonateChlchlorophyllCupcarbonuptakeCytb6fcytochromeb6fcomplexDCMU3-(3,4-dichlorophenyl)-1,1-dimethylureaDMn-dodecyl-β-D-maltosidecoliEscherichiacoliFdferredoxinFNRferredoxin-NADP+reductaseFRfar-redlightHEPES2-[4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonicacidKamRkanamycinresistantkDakilodaltonM55ΔndhBNBTnitrobluetetrazoliumNCBINationalCenterforBiotechnologyInformationNdhgenesencodingsubunitsofNAD(P)HdehydrogenaseNDH-1(NDH)NAD(P)HdehydrogenaseNDH-1LNDH-1largesizeNDH-1MNDH-1mediumsizeNDH-1SNDH-1smallsizeOPSoxygenicphotosynthesisspecificPCRpolymerasechainreactionPGR5protongradientregulation5IΔpHprotongradientacrossthethylakoidmembranePQplastoquinonePSIphotosystemIPSIIphotosystemIIRT-PCRreversetranscription-polymerasechainreactionRubiscoribulose1,5-bisphosphatecarboxylase/oxygenaseSDSsodiumdodecylsulfateSpRspectinomycinresistantTMthylakoidmembraneTristris(hydroxymethyl)-aminomethaneWTwildtypeII摘要蓝藻是一类能进行光合放氧的原核生物，也是研究光合作用的模式生物之一。1991年，人们在类囊体膜上发现了除光系统II(PSII)、细胞色素b6f、光系统I(PSI)和ATP合酶之外的第五类光合膜蛋白复合体——NADPH脱氢酶复合体(NDH-1)。在结构上，该复合体类似于大肠杆菌和线粒体呼吸链上的NADPH醌氧化还原酶(复合体I)，均呈“L-型”构造。然而，蓝藻基因组中不存在与大肠杆菌复合体I催化中心三个活性亚基同源的基因。在功能上，人们发现NDH-1复合体参与了多种能量反应，包括细胞呼吸、围绕PSI的循环电子传递和CO2吸收。进一步研究表明，NDH-1复合体对蓝藻细胞的生理活动，甚至生存起着至关重要的作用。因此，人们有必要对这一复合体展开深入的研究。在蓝藻细胞中，NDH-1复合体介导的循环电子传递(NDH-CET)是最主要的循环电子传递途径，能够大大地缓解细胞高光敏感的生长表型。因此，高光筛选策略可以帮助人们找出影响NDH-CET的蛋白因子。在此背景下，我们展开了本论文的研究，具体研究成果如下：首先，对转座子随机插入的集胞藻6803突变体库进行高光筛选，我们成功地获得了两个高光生长敏感，且NDH-CET受损的突变株。进一步研究发现，这两个突变株均为NdhQ缺失突变株(ΔndhQ)。其次，我们发现NdhQ的缺失削弱了NDH-1L复合体的组装效率，但不影响NDH-1复合体在类囊体膜上的积累。进一步的研究发现，NdhQ对于NDH-1L复合体在热下的稳定是必需的。因此NdhQ的缺失抑制细胞呼吸，但不影响CO2吸收。最后，在ndhP基因删除突变株(ΔndhP)的背景下缺失NdhQ，我们发现NDH-1L复合体几乎全部降解为了NDH-1M复合体，并且这一结果与突变株ΔndhD1/D2的结果类似。因此，NdhQ与NdhP共同稳定了NDH-1L复合体。综上所述，我们能够得出如下结论：NdhQ的缺失去稳定了NDH-1L复合体，损伤了NDH-CET和细胞呼吸活性，从而产生了高光敏感