一个新的mpl基因异常剪接体mpll391-v392ins12的鉴定及在骨髓增殖性肿瘤中的突变研究-identification of a new mpl gene splicing variant mpl391 - v 392 ins 12 and its mutation in bone marrow proliferative tumors.docxVIP

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2018-06-03 发布于上海
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一个新的mpl基因异常剪接体mpll391-v392ins12的鉴定及在骨髓增殖性肿瘤中的突变研究-identification of a new mpl gene splicing variant mpl391 - v 392 ins 12 and its mutation in bone marrow proliferative tumors.docx

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一个新的mpl基因异常剪接体mpll391-v392ins12的鉴定及在骨髓增殖性肿瘤中的突变研究-identification of a new mpl gene splicing variant mpl391 - v 392 ins 12 and its mutation in bone marrow proliferative tumors

一个新的MPL基因异常剪接体MPLL391-V392ins12的鉴定在骨髓增殖性肿瘤中的突变分析摘要目的：以不同方法对新发现的MPLL391-V392ins12异常剪接体进行鉴定，以证实其真实存在性；在骨髓增殖性肿瘤（MPN）患者中分析其突变发生情况，并与JAK2V617F、MPLexon10、CALR突变的患者比较来探讨其临床意义。方法：1、MPLL391-V392ins12剪接体的鉴定对目的RNA进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)，扩增MPL基因CDS序列，凝胶回收扩增产物，酶切后连接到T-载体中，转化DH5a感受态细胞，涂板，挑取菌落，碱性裂解法提取质粒，测序鉴定。针对剪接体的序列在不同位置设计引物进行PCR扩增，两对引物的扩增产物分别经聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶电泳，用凝胶成像仪对电泳结果进行扫描分析。2、MPLL391-V392ins12剪接体在MPN中突变情况分析收集MPN患者、正常人、其他血液肿瘤的骨髓或外周血标本，以及实体瘤细胞株，提取基因组总RNA，将总RNA逆转录为cDNA；对cDNA进行等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)扩增，经琼脂糖凝胶电泳进行结果分析，检测其在PV、ET、PMF中的突变情况。收集仅携带单一突变MPLL391-V392ins12、JAK2V617F、MPLexon10、CALR阳性的ET、PMF患者的实验室检查指标，分别两两进行统计学比较分析。结果：1、通过克隆测序，发现MPL基因存在一种新的转录产物，即MPL基因的第7和8外显子之间保留了36bp的内含子序列，导致蛋白编码序列氨基酸位点391与392之间插入12个氨基酸（谷、甘、亮、赖、亮、亮、脯、丙、天冬、异亮、脯、缬），故命名为MPLL391-V392ins12。根据MPLL391-V392ins12剪接体的序列设计不同引物进行PCR扩增，结果均得到该剪接体产物，说明了MPLL391-V392ins12的真实存在性。2、248例MPN患者中检测到19例存在MPLL391-V392ins12突变(总突变率7.66%)，其中PV1例,突变率1.92%(1/52)；ET14例,突变率9.66%(14/145)；PMF4例，突变率7.84%(4/51)；200例正常人群中未检测到突变；71例CML患者中检测到2例为阳性，其余肿瘤中均未检测到该剪接体。3、MPLL391-V392ins1突变和MPLexon10突变的ET患者性别、年龄、白细胞计数、血小板计数及血红蛋白差异均无统计学意义（P值均0.05）；MPLL391-V392ins12突变的ET患者年龄、白细胞计数低于JAK2V617F突变患者（P0.05），血小板计数低于CALR突变患者（P0.05）；MPLexon10突变的ET患者年龄、白细胞计数及血红蛋白低于JAK2V617F突变患者（P0.05），血红蛋白低于CALR突变患者（P0.05）；JAK2V617F突变的ET患者白细胞计数、血红蛋白高于CALR突变患者（P0.05）。MPLL391-V392ins12突变的PMF患者年龄小于JAK2V617F突变患者（P0.05）；JAK2V617F突变的PMF患者白细胞计数高于CALR突变患者（P0.05）。结论：1、本研究发现了MPL基因一个新的异常剪接体MPLL391-V392ins12，经查阅文献，目前尚无报道。病例筛查进一步证实MPLL391-V392ins12剪接体在三种经典MPN中均可发生突变，且主要见于ET、PMF，可能是MPN发病的潜在原因之一。2、ET患者中，MPLL391-V392ins12突变组呈现与JAK2V617F突变组和CALR突变组较为不同的实验室特征，而与MPLexon10突变组则较为相似，提示MPLL391-V392ins12突变在MPN的发病过程中可能发挥与MPLexon10突变类似的作用。关键词：骨髓增殖性肿瘤；MPL基因；异常剪接；MPLL391-V392ins12TheidentificationofanovelaberrantspliceosomeofMPLgene(MPLL391-V392ins12)inpatientswithmyeloproliferativeneoplasmsAbstractObjective:ToidentifythenovelMPLL391-V392ins12spliceosomeandconfirmthatitisatruespliceosomeofMPLgene.ThenanalyzeitsmutationoccurrenceinpatientswithMyeloproliferativeneoplasms(MPN),anddiscussitsclinicalsignificancebycompar