生物化学第一章 蛋白质121 ppt课件.ppt

第一章 蛋白质（Protein） 第一节  蛋白质主要元素组成：C、H、O、N、S 微量元素：P、Fe、Cu、Zn、Mo、I、Se 等。 蛋白质的分类 根据分子形状分类： 根据化学组成分类： 蛋白质主要功能： 催化功能； 结构功能； 调节功能； 防御功能； 运动功能； 运输功能； 信息功能； 储藏功能 ? ? ? ? ? ? 第二节 蛋白质的基本构件单位─氨基酸 ?-氨基酸的通式 二、氨基酸的分类 非极性R基团氨基酸 不带电荷极性R基团氨基酸 带电荷R基团氨基酸 三、氨基酸的性质 氨基酸的两性解离性质及等电点（pI） 甘氨酸滴定曲线 谷氨酸（A）和赖氨酸（B）滴定曲线和等电点计算 （2）氨基酸光学活性 2、紫外吸收光谱： 参与蛋白质组成的20种氨基酸中色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和苯丙氨酸(Phe)的R基团中含有苯环共轭双键系统，在紫外光区显示特征的吸收谱带，最大光吸收（?max）分别为280、275、和257nm。 由于大多数蛋白质都含有这些氨基酸残基，因此用紫外分光光度法可测定蛋白质含量。 蛋白质的最大吸收峰一般为:280nm . Try、Tyr、Phe的 紫外吸收光谱 （3）氨基酸的重要化学反应 氨基酸与茚三酮反应 氨基酸与2,4一二硝基氟苯(DNFB)的反应（Sanger反应） 氨基酸与苯异硫氰酯（PITC）的反应（Edman反应） 第三节 肽 一、肽及其命名 肽(peptide)是氨基酸的α-羧基与另一个氨基酸的α-氨基脱水形成的聚合物。 肽的命名是根据肽中所含氨基酸的数目来进行的,由两个氨基酸形成的肽称为二肽,由三个氨基酸形成的肽称三肽,如此类推。 由多个氨基酸组成的肽称为多肽，多肽一般形成链状，常称为肽链( peptide chain) 。 二、肽链的结构 多肽链结构示意图 肽单位 肽基的C、O和N原子间的共振相互作用 三、重要的天然活性肽 谷胱甘肽 短杆菌肽S 第四节 蛋白质的分子结构 蛋白质结构的主要层次 一、蛋白质的一级结构 例：牛胰岛素的一级结构 世界三大DNA序列和蛋白质序列的查询资料库： GenBank l 全称为：the National Center for Biotechnology Information at the National Library of Medicine at the National Institutes of Health. govl是指U.S government的一个分支机构。 EMBL http://www.cbi.ac.uk/ 它位于英国剑桥欧洲生物信息研究所（EBI）。 DDBJ http://www.ddbj.nig.ac.jp the DNA Data Bank of Japan. 由日本国立遗传学研究所承办。 蛋白质一级结构测定 二硫键的断裂 （2）分析每一条多肽链的氨基酸组成：蛋白质水解+氨基酸自动分析仪使用。 (3)鉴定多肽链N－末端、C－末端氨基酸残基； 多肽N、C-末端氨基酸的测定 （4）专一性部分裂解多肽链成较小的片段；每种样品至少用两种方法裂解，产生两套以上的片段。 a、胰蛋白酶：水解由Lys or Arg的羧基形成的肽键。 b、胰凝乳蛋白酶：水解由芳香族氨基酸（Phe,Trp or Tyr)的羧基形成的肽键。Leu,Met,His的羧基形成的肽键水解较慢。 Pro的氨基形成的肽键不被水解。 c、嗜热菌蛋白酶：水解疏水性强的氨基酸的氨基形成的肽键。（Leu,Ile,Phe,Trp,Val,Tyr,or Met) Pro or Gly的氨基形成的肽键不被水解。 d、溴化氰：水解由Met 的羧基形成的肽键。 消化道内几种蛋白酶的专一性 （5）肽片段的分离纯化 （6）测定各肽段的氨基酸顺序； 氨基酸序列测定 （7）片段重叠法重建完整多肽链一级结构； （8）确定半胱氨酸残基间形成二硫键交联桥的位置。 蛋白质顺序测定基本方法路线 片段重叠法确定肽段在多肽链中顺序示意 ?借助重叠肽确定肽段次序： 二、蛋白质的构象和维持构象的作用力 （一）构型与构象 构型（configuration）：立体异构体中取代原子或基团在空间的取向； 一个碳原子和四个不同的基团相连时，只可能有两种不同的空间排列，这两种不同的空间排列叫做不同的构型。这两种构型如果没有共价键的破裂是不能互变的。 构象（conformation）：是指取代基团当单键旋转时可能形成