磁性纳米野生内切酶的研制和应用.pdfVIP

上海师范丈学理学硕士论文 摘要 摘要 化学小分子与生物大分子的相互作用，尤其是人工核酸定位切断试剂对DNA的切断在 D默序列测定、染色体分析、基因治疗以及DNA重组方面有着广泛的用途，因此进行人工合 成限制性内切核酸酶的研究具有重要的理论意义和应用价值。同时，随着纳米技术向生命科 学领域的不断渗透，利用纳米技术研究和解决生命科学领域中的重大问题，推动纳米生物技 术的发展，正成为当前重要的前沿研究领域之一。本论文在这两者的交叉领域进行了较为系 统的研究，并取得了以下几个有意义的结果。 (1)一般人工核酸定位切断试剂由识别和切割系统两个系统构成。本文中，我们采用 PNA作为识别系统，Ce(Ⅳ)配合物切割系统，合成了PNA-ce(Ⅳ)配合物人工核酸定位切 断试剂(人：Ij核酸酶)，并用MALDI-ToF质谱对其进行了表征，运用荧光光谱法研究了该 识别系统PNA与其部分互补的靶标26 配台物人工核酸酶在生理条件下对靶标26 mers翻)NA进行了定位切断，并用离子对反相高 效液相色谱对反应产物进行了分析，试验结果表明该试剂对靶标ssDNA的定位切断取得了 满意的效果。 (2)其后，我们通过共价键含的方法将将PNA探针连接到磁性纳米粒子表面(MNPs)， 并将其与靶标DNA进行了杂交。同时，建立了一种基于表面增强拉曼光谱对PNA在磁性纳 米粒子表面的键合及其与靶标DNA的杂交过程进行检测的方法。实验结果表明：建立的方 法是有效的：PNA探针已成功地键合到磁性纳米粒子的表面．并且仍然有很好的生物活性。 (3)将以寡聚核苷酸(ODN)为识别系统的人工核酸定位切断试剂共价键合到磁性纳米 的表面，得到了基于磁性纳米粒子的ODN人工核酸切割试剂(即ODN磁性纳米人工内切 酶)，其后我雷1利翻其对靶标DNA进行了定位切断实验，实验结果表明．该ODN磁性纳米 人工内切酶在合适的条件下，能够迅速有效的对靶标DNA进行切断，且切断位点与理论预期 的一致。随后，我们尝试以类似的方法将PNA核酸定位切割试剂连接到磁性纳米粒子上． 制成了基于磁性纳米粒子的PNA人工核酸切割试剂(即PNA磁性纳米人工内切酶)。并对 其初步进行了定位切断实验，实验结果表明，合成的PNA磁性纳米人工内切酶能够对靶标 D1qA进行定位切断，切割后产物是预期的产物。 关键词：肽核酸(PNA)；磁性纳米粒子(Ml岬)；磁性纳米人工内切酶：水解切断；离子 对反相高效液相色谱(IP-RP-HPLC)；增强拉曼光谱(SERs) !!塑堑苎查兰些堂堡圭堡塞——————————塑!!一 Abstract chemical and of molecules sequence The{nteraction bjologicalones，especiallyspecinc DNAhaVe suchasinDNA and of many sequence rec02nitjonsite-specificcIeavage applications fecombinantDNA manipulation．so detemin矾ons，chfomosomeanlyses，窖enc也erapeutics，and DNA restriction itis cleavageregent(artificialen巧mes) developsequence—spec讯c s培nificantto