大鼠肌肉素基因克隆、融会表达及多克隆抗体制备.pdfVIP

大鼠肌肉素基因克隆、融合表达及多克隆抗体制各 英文缩写词 氨苄青霉素 肌肉素 心钠素 C型利钠尿肽、 脑钠素 Q一葡萄糖苷酶抑制剂 餐后血糖 过氧化物酶激活型增殖体受体y2 胰一一十二指肠同源区蛋白质 磺酰脲受体l 葡萄糖转运蛋白 PPAR，辅激活物l 核内因子。B I。B激酶 胰岛素受体底物 细胞因子传导信号抑制蛋白 美国糖尿病学会 空腹血糖 血糖 邻苯二胺 脚脓脚呻肿枷隅眦孵㈣哪嘲籼胍贼溺雠眦髓㈣啪 3．3一二氨基联苯胺 大鼠肌肉素基因克隆、融台表达及多克隆抗体制备 摘 要 肌肉素是肌细胞特异分泌的多肽蛋白质，参与机体糖代谢和脂代谢。肌肉素 作为一种自分泌和旁分泌因子在骨骼肌中起作用，其mRNA几乎只在骨骼肌中表 达，并受营养条件和激素因子尤其是胰岛素的调控，在肥胖的患有胰岛素抵抗的 小鼠骨骼肌中，肌肉素的mRNA表达水平相对于正常小鼠较高，而肌肉素蛋白能 抑制由胰岛素引起的葡萄糖吸收和糖原合成，由此推测肌肉素可能与糖尿病的发 生、发展有着密切联系。论文进行了原核表达并纯化肌肉素，制各肌肉索的多克 隆抗体，为深入了解删钟J加基因的功能及其临床应用奠定基础。 本文从大鼠的骨骼肌中提取总RNA，用RT—Pc方法克隆到肌肉素的cDNA，将 肌肉素基因片段插入含GsT标签的融合表达载体pGEx-5x一3中，构建重组质粒 序列的相似度为99．25％，所编码的蛋白质的氨基酸序列相似度为100％． 将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，并用I盯G诱导转化菌表达目的蛋 白，sDs—PAGE鉴定该转化菌表达了37kDa，并用免疫印迹分析证明该蛋白为 GsT～Musclin重组蛋白。经表达形式分析证明，融合蛋白小部分可溶，用 GsH-SepharoseResin进行纯化后，免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体，利用问 接ELIsA法和westernblot检测该重组蛋白能有效地诱导日本大耳白兔产生高 水平的特异性IgG，抗血清效价可达1：32000左右，通过免疫前血清与免疫后 血清对比，用western印迹检测抗体具有很好的特异性。这些结果表明该重组蛋 白免疫血清可用作检测肌肉素蛋白的特异性抗体。 关键词： 肌肉素 克隆 原核表达 多克隆抗体 大鼠肌随素基因克隆、融合表达及多克隆抗体制各 Abstract