近红外荧光试剂cy系列的分解研究.pdfVIP

近红外荧光试剂Cy系列的合成研究 温俊峰 摘要荧光标记技术起源于20世纪40年代，随着现代医学、分子生物学的发 展和各种先进荧光检测技术及仪器的应用，荧光标记作为一种非放射性的标记技 术受到很大程度的重视，并取得了迅速的发展，广泛应用于细胞内外物质检测、 核酸的检测及疾病早期诊断等。近红外荧光试剂cy系列是不同杂环核通过甲川链 连接起来的一类不饱和杂环化合物，在检测及定量标记缀分时具有很高的消光系 数及量子产率，成为基因芯片测试用的首选荧光标记物。cy系列试剂虽然已商品 化，如Cy3、Cy5、Cy5．5，但价格昂贵，使得其应用受到了限制。鉴于cy系列试 剂的广泛用途和应用前景，探索低成本，高收率的合成方法，无疑会拓宽Cy系列 荧光试剂在国内的应用，促进生物学和医药学的发展。本文探讨了生物荧光分析 试剂cy系列的合成研究，报告了该研究的思路和取得的成果。 本文第一章首先综述了常见的荧光标记试剂以及它们的优缺点，重点介绍了 Cy系列试剂的结构特点、光谱特征、光稳定性及水溶性。由于Cy系列试剂的特殊 结构使其在荧光标记方面与其他试剂相比有着显著的优点，在生物芯片和蛋白质 组学方面得到了广泛的应用，因此文章综述了Cy系列试剂在DNA芯片和蛋白质组 学研究中的标记方式以及应用。 第二章探讨了对肼基苯磺酸的合成工艺。对肼基苯磺酸是由对氨基苯磺酸经 亚硝酸钠重氨化得到的重氮盐用亚硫酸氢钠还原、水解、硫酸酸化制得，本文经 多次实验确定了反应原料、用量及反应条件，得到的产品纯度好，产率高。 论文第三章合成了B一苯胺基丙烯醛缩苯胺。该研究以丙炔醇为原料，经三氧 化铬氧化生成丙炔醛后，直接与苯胺反应简便地合成了6-苯胺基丙烯醛缩苯胺， 并通过正交实验的方法优化了反应条件。得出最佳反应条件为：6，3mL(0．10m01) 丙炔醇中加入8．59(O．085m01)三氧化铬的硫酸水溶液，氧化反应2小时后，有机相 缩苯胺盐酸盐，收率为48．4％。将该盐酸盐溶于甲醇与氢氧化钠溶液作用得6一苯胺 基丙烯醛缩苯胺。 论文第四章合成N，N’．二苯基甲脒，本合成法以甲酸与苯胺为原料，硼砂为 催化剂，并在脱水剂的存在下，经两步脱水反应而得二苯甲脒盐酸盐，再经碱化 得最终产品。本文还通过1HNMR跟踪反应，确定了合成二苯甲脒的最佳反应时 间，在不影响反应收率的前提下，大大缩短了反应时间。 论文第五章探讨jCy系列荧光试剂的合成研究。从最基本的原料对肼基苯磺 酸开始，经过吲哚环的成环，亲核取代，缩合等多步反应，通过薄层层析法分离 纯化得到]Cy3、Cy5年l可直接用于蛋白标记的Cy3琥珀酰亚氨酯、Cy5琥珀酰亚氨 酯。 本研究工作不仅得到了拟合成的产品Cy3、Cy5、Cy3琥珀酰亚氨酯．}lCy5琥 珀酰亚氨酯，而且还得到了十多种其他化学试剂，如对肼基苯磺酸、B．苯胺基丙 烯醛缩苯胺、N，N’．二苯基甲脒、2，3，3-三甲基吲哚．5一磺酸盐、1一乙基．2，3，3．三甲基 这些试剂在工业与科研中都有着重要的应用。本研究还通过1HNMR法测定了展 开剂的组分，重新配制了展开剂，节约了试剂用量。 关键词：对肼基苯磺酸，B．苯胺基丙烯醛缩苯胺，N，N’一二苯基甲脒，Cy3， Cy5，Cy3琥珀酰亚氨酯，Cy5琥珀酰亚氨酯 for Near-infrared Synthesis Fluorescence Probe of Series ReagentsCy Wen Junfeng AbstractWith of the and medicine，molecular developments biochemistry variousadvancedfluorescence