微分离分析新方法研讨.pdf

摘要 ■ 摘要 分析体系的微型化是现代分析化学发展的一个重要方向。为了提高分析的灵 敏度和通量，满足现场实时分析的需要，降低分析成本和样品消耗量，发展微量 化、集成化的分析方法已成为当前研究的前沿领域。微流控芯片技术是上世纪九 十年代初发展起来的一门新兴技术，因其具有样品消耗小、分析速度快、易实现 阵列化和集成化的优点而吸引了研究者的广泛关注，成为微型化分析领域中的研 究热点。本论文的研究目的，一是要拓展基于微流控电泳芯片的新分离方法，二 是要为实现微流控集成化分析提供基础。围绕这两个目的，本论文主要进行了基 于微流控芯片电泳的多维分离方法研究和基于毛细管的样品预处理、分离和检测 集成化分析方法研究，全文共分五章，主要内容如下： 第一章为文献综述，详细介绍了微分析技术的现状和发展趋势。从微通道分 离、检测和样品预处理等方面展开综述，介绍了毛细管液相色谱和毛细管电泳两 大微分离手段以及微通道多维分离方法，概述了能够用于微通道检测的激光诱导 荧光(LIF)、电化学和质谱(MS)等多种检测技术，总结了微通道中的样品纯 化、富集和衍生等预处理方法。最后，阐述了本论文的研究背景和选题意义。 第二章首次建立了毛细管液相色谱和微流控芯片电泳联用的新型二维分离 ● 系统。多维分离是增强分离体系峰容量的强有力手段，本研究的创新之处，就是 将微流控芯片电泳应用到液相色谱和电泳联用的二维分离模式中，既发挥了毛细 管液相色谱和：卷片电泳各自的分离优势，又解决了接口制作的难题。通过芯片上 的小孔，第一维的液相色谱毛细管柱可以直接与芯片相连，第一维的分离产物连 续进入芯片，依靠芯片上的交叉通道和电压切换实现第二维的进样。该系统结合 了毛细管液相色谱高效分离的优点和微流控芯片电泳快速分离的特性，巧妙地利 用了微流控芯片的交叉通道和电控进样方式，具有接口制作简单、死体积小、操 作便利、峰容量高的优点。本章详细描述了该二维系统的构建方法，对两维连接 的实验参数进行了考察，获得了蛋白质酶解产物的全二维分离谱图。 第三章发展了针对兴奋剂的毛细管电泳分离．激光诱导荧光检测(UF)方法。 兴奋剂的检测是微流控芯片分析技术的重要应用领域。在兴奋剂问题日益突出的 今天，发展快速、微型化、自动化的兴奋剂检测新方法具有重要意义。在微流控 芯片上实现尿样中兴奋剂的样品预处理、分离和检测集成化分析，将为实现兴奋 剂的高通量和高灵敏度检测提供新的途径。毛细管具有与芯片微通道相近的内径 尺寸，因此，基于毛细管的兴奋剂分析方法是通往芯片集成化分析的桥梁和必经 之路。本研究的创新之处，就是针对将来芯片上的检测要求，发展了高灵敏度的 摘要 LIF直接检测法和间接检测法，为芯片微通道里的刺激剂和利尿剂检测提供了依 据。在本章中，首先建立了LIF直接检测的一般方法，构建了包括自动进样器、 分离毛细管和LIF检测器的电泳分离／检测体系，在此基础上，建立了针对麻黄 碱类刺激剂的直接LIF检测方法。以荧光素异硫氰酸酯(FrrC)为荧光衍生试 剂，研究了麻黄碱、庚胺醇、去甲基伪麻黄碱等刺激剂的荧光衍生条件和毛细管 电泳分离条件。由于直接检测法对样品结构有一定要求，在寻求不到合适的衍生 试剂时，间接检测法作为一种通用检测方法显示出了其优越性。本章对用于间接 LIF检测的多种电泳缓冲体系进行了考察，建立了以三乙胺／荧光素／正丁醇为缓 冲体系的间接检测方法，对尿液中的四种酸性利尿剂(依他尼酸、氯噻酮、布美 它尼和苄氟噻嗪)进行了分析。 第四章发展了毛细管柱内的样品预处理方法，主要是微通道固相萃取和固相 衍生方法，