小分子大豆多肽的制备和星散纯化研究.pdfVIP

小分子大豆多肽的制备和分离纯化研究 摘要 大豆中蛋白质含量高，氨基酸组成合理，大豆多肽是大豆蛋白经酶解 后产生的分子量较低的化合物。研究表明：其氨基酸组成与大豆蛋白基本相 同，且在整个pH范围内均有良好的溶解性及低粘度，比大豆蛋白具有更好 的营养价值和生物功能，如抗氧化、降血压、降胆固醇、抗疲劳等。这些特 性使得大豆多肽在食品、医药、化妆品等领域得到广泛的开发和利用。 本文主要研究大豆分离蛋白水解过程中，在微波加热、保持体系的pH、 温度不变条件下，用碱性蛋白酶和中性蛋白酶、胰蛋白酶三酶水解大豆分离 蛋白制备小分子大豆肽。以大豆分离蛋白水解氨基氮为评价指标，用荧光分 析等方法，系统研究了水解工艺过程，并详细介绍了主要的工艺步骤。重点 讨论了影响酶水解的各种因素如酶用量，pH值，底物浓度，反应温度，微波 作用时间等。首先用单酶水解大豆分离蛋白，确定最佳条件，然后确定双酶、 三酶分步协同水解的顺序和制备小分子大豆多肽的最佳条件，以及大豆多肽 的理化性质与毛细管电泳法、凝胶排阻色谱法、反相高效液相色谱法分离纯 化条件，并通过毛细管电泳方法、凝胶排阻色谱法对水解多肽的分子量分布 范围进行测定。实验表明：三酶水解优于单酶和双酶，制得的大豆肽分子量 主要集中在200-1100D之间。实验结果如下： ‘ 1．小分子大豆肽的制各 ①大豆分离蛋白溶液在85℃水浴加热预处理15min， ②单酶水解最佳条件： 胰蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳条件：水解最适pH值为8．0，温度50 ℃，底物浓度5％，酶用量E／S为10％，微波水解时间15min，氨基氮含量可 达6．40 mg／g： 碱性蛋白酶水解大豆分离蛋白的最佳条件是：水解最适pH值为8．5，温度 min，此时AN为62．10 55℃，酶用量E／S为7％，底物浓度5％，微波加热水解15 mmol／L 中性蛋白酶水解大豆蛋白最佳条件为：水解最适pH7．0，温度50℃，酶 mmol／L。 最高为39．89 (9三酶分步协同水解的最佳条件： 将底物浓度为5％的料液，经预处理后，先加碱性蛋白酶，在pH8．5，E／S 水解效果明显高于单酶、双酶。 2．毛细管分离检测条件 将大豆多肽进行了分离和检测。 3．凝胶排阻色谱法分离纯化条件 mL 以(O．1mol／LNaCI+50mmol／LTris／pH8)溶液平衡和洗脱，洗脱速度3．O 4．反相高效液相色谱的分离条件 RPLC色谱柱对大豆多肽样品的分离过程中，对其进样量和洗脱梯度进行 测波长220nm，在此最佳色谱条件下，大豆肽得到了初步分离。 5．大豆多肽理化性质 经对大豆肽氨基酸分析得知，大豆肽的组成几乎完全与大豆蛋白一样，具 有氨基酸比例平衡、含量丰富的特点。通过电泳和凝胶柱分析，可知大豆肽 100D之间。 分子量分布主要在200—1 所制备的大豆肽具有良好的溶解性且不受pH的影响，具有高浓度、低 粘度的特点；具有良好的吸湿性和保湿性及热稳定性；大豆多肽的起泡能力 强而泡沫稳定性差。 关键词：大豆分离蛋白，小分子大豆多肽，多酶水解，微波，高效毛细管电 泳，凝胶排阻色谱，反相高效液相色谱 II on of LowMolecule StudyPreparation Weight Soybean and PolypeptidesSeperation Abstract contain withwell—balancedaminoacid So