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蓝莓多糖提取及分离纯化研究 　　摘要：蓝莓作为人体抗氧化第一卫士的水果，有对衰老、癌症和心脏疾病的抗氧化能力，另外还可以解除眼睛疲劳，改善视力。除此之外,还能延缓脑神衰老，增强记忆力，还有就是可以预防尿道感染。因此受大家越来越大的重视。蓝莓果实更是加工的上好原料，可制成果酱、蜜饯、糖果、冰淇淋等，蓝霉在食品行业还是有很大研究价值的。而其中作为有效成分之一的多糖，渐渐进入人们视野。现今，国内外对多糖的研究比较深刻，已经意识到多糖对于医学等生命科学领域中的重要性。因此，关于蓝莓多糖的研究更是成为了热门研究对象。最佳提取工艺为添加纤维素酶反应时间为10min,温度40℃添加量为0.6%，多糖所得率2.319%。用Sevage法脱蛋白，最佳脱蛋白率为0.045%所得多糖量最多，为86.53846。脱色素的最佳双氧水添加量为30%pH值为9.0氧化时间为3h，温度50℃。在此条件下提取和纯化效果最好。 　　关键词：蓝莓；多糖；提取；纯化 　　[中图分类号]S663.9 [文献标识码]A [文章编号]1009-9646（2012）4-0035-04 　　随着人们生活水平的不断改善，人们对健康越来越重视，对疾病的预防也有很大认识。蓝莓作为新兴具有保健功能的浆果已走进人们的视线，其必将掀起一股热潮。 　　我国对蓝莓的加工还处于起步阶段，主要是鲜食和生产速冻产品，深加工产品也不多，主要开发蓝莓汁饮料、蓝莓酒和蓝莓果酱产品。由于蓝莓特有的活性成分，今后我们开发产品还要考虑其生物功能，研究新产品。 　　目前国际市场上开发利用的蓝莓生物功能主要是花色苷的提取物，对于多糖研究不多。而蓝莓色素有其自身缺陷，多糖的兴起成为必然。 　　本文主要在以下方面开展研究工作： 　　（1）将传统水浸液与酶法提取等提取技术应用于蓝莓多糖的提取研究，对比出蓝莓多糖提取的最佳方法，最终确定其最佳工艺参数。 　　（2）对蓝莓的脱色方法进行研究，并确定最佳脱色工艺。 　　（3）对蓝莓多糖脱蛋白方法进行研究，确定脱蛋白工艺。 　　本实验的研究特点和创新： 　　目前国内外对于蓝莓的研究正蓄势待发，对于蓝莓多糖的研究还未见报道。从提取花色苷后的蓝莓残渣中再提取多糖物质，再利用一些化学制剂分离纯化多糖，这不仅降低了成本，节省能源消耗，还能提高蓝莓产品的商业价值。 　　本课题主要是对蓝莓多糖的提取和分离纯化进行了科学研究。 　　一、材料与方法 　　1.材料与仪器 　　材料：沈阳农业大学食品学院脱色以后的蓝莓，品种是辽宁蓝金实业有限公司的北陆；生化级，国药集团化学试剂有限公司出品的酶活性?1500u/g的纤维素酶，双氧水、葡萄糖、浓硫酸、苯酚、乙醇、丙酮等为分析纯，蒸馏水。 　　仪器：粉碎机，上海世邦有限公司；7200型可见分光光度计，尤尼柯（上海）有限公司；电热恒温水浴锅，常州国华电器有限公司；TDL-5000B型离心机，上海安亭科学仪器厂；RE―52型旋转蒸发仪，上海博通经贸有限公司；SHZ―IIIB型循环水真空泵，上海华琦科学仪器有限公司；数显pH计，上海精密科学仪器有限公司；DZF-6050型真空干燥箱，上海一恒科技有限公司。 　　2.实验研究内容与方法 　　（1）多糖含量的测定：精密称取105℃干燥至恒重的标准葡萄糖2.559g，定容至500mL容量瓶中；吸取3mL溶液定容于100mL容量瓶中，得到浓度为0.1024mg/mL的标准溶液。分别吸取标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mL于25mL具塞比色管中，加蒸馏水补充至1.0mL；摇匀，分别加入5%的苯酚溶液1.6mL，浓硫酸7mL；40℃水浴中放置0.5h，冷却至室温。另取1mL蒸馏水，加同量苯酚和浓硫酸，同法操作，制成空白对照样。溶液在493.5nm处测定吸光度，以吸光度(y)对葡萄糖的浓度(X)进行回归方程的计算。 　　准确称取多糖样液1.0ml，再加5%苯酚1.6ml和浓硫酸7.0ml，其他按照标准曲线做，测吸光度。将所得结果代入回归方程就可得出多糖含量。样品多糖所得率（%）=多糖含量/样品干重?00% 　　（2）多糖的提取工艺：树莓残渣→粉碎→加水60倍搅拌→调pH值→加纤维素酶→100℃灭酶15min→水浸1h→ 3000r/min离心10min→醇沉80%→ 3000r/min离心10min→丙酮,乙醇洗涤抽滤→真空干燥得粗多糖 　　传统水浸提法：树莓残渣→粉碎→加水60倍搅拌→调pH值→温度在90→水浸4h→过滤→除蛋白→脱色→真空干燥得粗多糖 　　 　　第一次水提的多糖提取率为2.33%，粗多糖(干重)的提取率为6.82%.第二次酶提的多糖提取率为0.64%，粗多糖(干重)的提取率为1.11%，分别占二次总提取量的21.5%和