组织学制片技术(本科)PPT.ppt

1 70%乙醇 常温 12～24h 2 80%乙醇 常温 12～24h 3 90%乙醇 常温 2～3h 4 95%乙醇Ⅰ 常温 1～2h 5 95%乙醇Ⅱ 常温 1～2h 6 100%乙醇Ⅰ 常温 1h 7 100%乙醇Ⅱ 常温 1h 8 二甲苯Ⅰ 常温 15~20min 9 二甲苯Ⅱ 常温 15~20min 10 石蜡Ⅰ 48~50℃ 0.5h 11 石蜡Ⅱ 48~50℃ 0.5h 12 石蜡Ⅲ 58~60℃ 0.5h 13 石蜡Ⅳ 58~60℃ 0.5h 组织块处理时间表 石蜡切片机可分三个部分，一是安装切片刀的部分，有调节刀片斜度和固着刀片的螺旋。一是安装材料的部分，也有螺旋可以调节材料的位置。另一是操纵在旋转中向前推进的部分，控制着切片的厚薄，是比较重要而复杂的部分。 （六）组织切片技术 1、切片机简介： 石蜡切片机 1、切片机 德国冰冻切片机 冰冻切片机 制冷系统 自动进样/切片系统 照明系统 2、载玻片和盖玻片处理：新载玻片上有油污，必须经过清洁液浸泡、充分漂洗、酒精浸泡、烤干备用。 (1) 明胶液：这是粘片最常用的胶液，简便优良。 (2)蛋白甘油：鸡蛋清 50ml ，甘 油 50m1 ,水杨酸纳 1g 。 （3）树脂胶：又称白色乳胶，使用浓度为1%～2%，以蒸馏水稀释即可。 （4） 多聚赖氨酸，APES（3-氨丙基-乙氧基甲硅烷）。 3、载玻片上涂粘附剂： 4．切片步骤： （1）切片刀或一次性切片刀必须锋利。 （2）将切片刀安装在持刀座上（以15°为宜）。 （3）将蜡块（包埋盒）固定于支持器上，调整蜡块和刀刃至适当位置。 （4）细心移动刀座或蜡块支持器，使蜡块与刀刃接触，旋紧刀座和蜡块支持器。 （5）修整蜡块（粗切）：匀速旋转切片轮，修切蜡块表面至包埋其中的组织块完整地全部切到。 组织病理学常用技术基本理论——第2节、第3节 主讲人：组胚教研室 林卡莉 目的要求 1、了解组织学制片的基本程序； 2、熟悉HE染色的步骤； 3、掌握HE染色结果的观察。 第二节 组织学常用的几种标本类型 见视频“组织学制片方法” 1．切片标本：组织经固定、切片（包括冰冻切片、石蜡切片及火棉胶切片）染色、封固而制成的各种玻片标本。它为组织学中最常用的标本。 第二节 组织学常用的几种标本类型 2．铺片标本：将肠系膜或皮下组织铺于载玻片上，经固定、染色、封固而制成的标本。 4．磨片标本：不经脱钙及切片手续，而直接用手工在磨石上磨制成薄片，以便在显微镜下观察的骨、牙磨片标本。 5．分离标本：将极小组织块用化学药物的水溶液浸泡后，溶去其细胞间质，采用机械分离方法（如振荡、针拨等方式）使之分离成单个而又完整的细胞，经染色后涂于载玻片上进行镜检。 6．压片标本：组织经化学药物软化及染色后，用盖片压封于载玻片上进行镜检的标本。如运动终板的制作。 7．整装标本：一种是将很小的动物或早期胚胎经固定、染色后，封固于载玻片上。另一种是将小动物、胚胎或病变器官经固定后，保存于固定液中瓶装供肉眼观察用。可了解胚体的表面立体形态特征及病变部位与周围组织的毗邻关系。 8．活体标本：如将蛙的口腔粘膜取下放于载玻片上，迅速滴加生理盐水或Ringer氏液以观察其纤毛运动。其它如精子运动亦可按此方法进行观察。 9．血管注射标本： 一种是将树脂类铸形剂经血管灌注后，用强酸或强碱腐蚀血管周围组织而制成的血管铸形标本，可瓶装供肉眼观察或进一步处理后作扫描电镜观察。另一种是将染料加明胶配制成染色液注入血管内，然后取材、固定、包埋、切片和封固所制成的组织切片标本。这类标本主要用于了解血管的走行及其与所支配组织或器官的相互关系。 组织切片的制作方法有：石蜡切片、冰冻切片、火棉胶切片、明胶切片、振动切片、塑料切片（半薄切片）、超薄切片（电镜标本）、碳蜡切片等。石蜡切片是最常用的方法，本节将较详细讲授其制作步骤。 第三节 组织切片的常规制作 （一） 概述 组织切片制作方法的基本程序： 取材→固定→脱水→透明→包埋→切片→染色→封固。 （1）??? 断头法： （2）??? 麻醉法： （3）??? 空气栓塞法： （二）动物的致死与取材 1、动物致死法： (1) 所取材料越新鲜越好； (2) 切取组织的刀剪刃口必须锋利 ； (3) 取材时必须考虑切面的方向 ； (4) 组织块应力求小而薄 ； (5) 收缩较大的新鲜组织 ； (6) 注意清洁 ； (7) 用作免疫组化的组织取材 ； (8) 病理取材 。 2、组织取材时应注意： 粘膜 粘膜 下层 肌层 浆膜 胃壁结构模式图 　　使细胞内蛋白质凝固，终止或抑制外源性和内源性酶活性，防止组织