细胞工程学 第2章PPT.ppt

细胞培养前的准备工作 ; 细胞培养技术是生命科学中常用的研究手段，动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使细胞或组织在体外生存、生长并维持结构和功能的一门技术。 ; 细胞培养( Cell culture )：指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟机体的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。; 活细胞是构成活的有机体的基本单位。 生、老、病、死、优生、抗衰老、防治各种疾病的途径、人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，等等均与活细胞的研究密切相关。;第一节 细胞培养研究的发展简史;1839年：T.A.H.Schwann（德） 动物学家施旺受到施莱登的启发，结合自身的动物细胞研究成果，把细胞说扩大到动物界，提出一切动物组织均由细胞组成，从而建立了生物学中统一的细胞学说。 ;1859年：Vupian(法) 蛙尾部组织切下放入普通水中进行“培养”，观察到生长和分化现象。 1885年：Roux(德) 把鸡胚的神经板在温热的生理盐水中维持其存活数天，这是有记录的第一个体外移植成功的例子，也是首次体外培养的尝试 。; 1897年：B .Loeb 首次在含有少量血浆凝块的试管中培养成年兔的肝、肾、甲状腺和卵巢植块，植块在3天内仍能保持正常的组织学结构。这是器官培养的最早尝试。;1906年：SP Beele J Ewing 盖片悬滴法用动物血清使狗的淋巴肉瘤细胞在体外存活了72小时。 体外培养技术的开端。 问题：血浆与血清的区别？; 血浆是离开血管的全血经抗凝处理后，通过离心沉淀，所获得的不含细胞成分的液体，其中含有纤维蛋白原（纤维蛋白原能转换成纤维蛋白，具有凝血作用），若向血浆中加入Ca2+ ，血浆会发生再凝固，因此血浆中不含游离的Ca2+。; 血清是离体的血液凝固之后，经血凝块聚缩释出的液体，其中已无纤维蛋白原，但含有游离的 Ca2+，若向其中再加入 Ca2+，血清也不会再凝固。 血清中少了很多的凝血因子，但多了很多的凝血产物。另外，血清中含有特异性免疫体(如抗毒素或凝集素)的免疫血清(抗菌素血清)。 ;1907年：R Harrison A Carrel 将蛙胚髓管部的小片接种于蛙的淋巴液中，并用盖片悬滴法培养细胞，有神经突起从培养的神经组织块长出。第一次较为系统的观察了体外培养活体组织的结果。 真正创立体外培养技术。 ;;法国科学家A.Carrel的实验贡献: 第一次将无菌操作概念引入体外培养实验中。 创立培养组织包埋技术、营养供应以及传代培养等许多条件和方法并引入盖玻片悬滴培养系统。;作为他技术才华的标志： 他在完全没有抗生素的条件下，从一个鸡胚心脏组织开始，将不断进行细胞传代，竟使鸡胚心脏的细胞维持生存了34年，先后传代3400次，令人信服地证明动物细胞有可能在体外无限地生长。; 1911年：M R Lewis 和W H Lewis兄弟对体外细胞生存所必需的条件进行了研究初步探索，研究了NaCl、CaCl、KCl、NaHCO3等生理盐溶液成分与培养物生长的关系。;1913年：Steinhand 体外培养痘苗病毒，为病毒学应用奠定基础。 1915年：Goldschmidt 无脊椎动物组织的体外培养，成功的培养了鳞翅目昆虫组织。; 1925年：Maximow 双盖片悬滴培养法。 1926年： Carrely 卡氏瓶培养法，开创玻璃瓶培养方法。 1926年：Strangeways 试管培养法。;1933年：Gel 旋转管培养法，并以此建立了许多细胞系，如：Hela细胞系。 1949年：Polge等 发现甘油保护储存细胞功能，解决冷冻细胞受损的问题。 ;1950年：Morgan等人提出的199人工培养基 配方。 1951年：Shannon和Earle建立T瓶培养法。 1951年：Poment改良和设计了结构简单 且易于消毒的灌流小室，使得 体外培养的细胞能够在不断更 新的培养液中生长。 1954年：Earle建立了悬浮培养法。 ;1957年：Dullbecco等人开始采用胰蛋 白酶消化处理来分离细胞的方法以及应用液体培养基的方法，使得体外培养单层细胞成为可能。 1959年：Lovelock发现了一种新的化学冷冻保护剂二甲亚砜，冻存细胞效果更好。;1967年：AL Van