荧光定量PCR单探针法与双探针法对甲型H1N1流感检测对比分析.docVIP

荧光定量PCR单探针法与双探针法对甲型H1N1流感检测对比分析 　　【摘要】目的对比分析荧光定量PCR单探针法与双探针法对甲型H1N1流感检测的灵敏度、特异性及准确率，总结其临床应用价值。方法选取我院2009年11月至2011年11月流感样的病例268例，分别留取其鼻咽拭子样本送实验室，分别采取进行荧光定量PCR单探针法与双探针法进行甲型H1N1流感检测，观察对比两种检测方法的检出率、灵敏度、特异性及准确率，进行统计学分析。结果两种方法检测的灵敏度、特异性及准确率相对皆无明显差异（P＞0.05），无统计学意义。两种方法检测的出结果时间及检测费用对比有明显差异（P＜0.05），具有统计学意义。结论荧光定量PCR单探针法与双探针法对甲型H1N1流感检测的灵敏度、特异性及准确率间无明显差别，皆能有效地检出甲型H1N1流感病毒，但两种方法各自有其优缺点；临床实践中应根据实际需要，选择性价比高的方法进行检测，???有重要的临床意义。 　　【关键词】荧光定量PCR；单探针法；双探针法；甲型H1N1流感 　　目前，临床上对流感爆发疫情病原学检测和监测中，一般常用的病毒分离培养法、PCR检测法、胶体金快速检测法等，本研究通过对比分析荧光定量PCR单探针法与双探针法对甲型H1N1流感检测的灵敏度、特异性及准确率，总结其临床应用价值如下： 　　1资料与方法 　　1.1一般资料选取我院2009年11月至2011年11月流感样的病例268例，男有131例，女有137例，年龄在6-34岁，中位年龄为16.6±2.3岁，入院时临床表现为发热（体温在38摄氏度或以上）、咽痛/咳嗽，分别留取其鼻咽拭子样本送实验室，分别采取进行荧光定量PCR单探针法与双探针法进行甲型H1N1流感检测，观察对比两种检测方法的检出率、灵敏度、特异性及准确率，进行统计学分析。 　　1.2方法 　　1.2.1单探针法 　　1.2.1.1采集方法将鼻咽拭子样本放进Hanks液中，采集后24h内检测的样本可在4-8摄氏度下进行保存，采集后无法在24h内进行检测的样本将其置入到零下70摄氏度下进行保存。 　　1.2.1.2试剂盒与检测方法使用的是实时荧光PCR仪（美国应用生物公司生产，型号：7300），甲型H1N1流感病毒的RNA检测试剂盒（北京金豪制药股份公司提供），提取试剂使用的是Qiagen核酸分离的提取试剂盒（QIAampViralRNAMiniKit（50）提供，型号：Cat.No.52904），采取荧光PCR法进行检测；皆按照试剂盒上说明书进行严格操作，共配制出SWFluAl、SwHl、FluA三种反应液，其检测通道皆为FAM，在严格质控下完成操作。 　　1.2.2双探针法 　　1.2.2.1采集方法：同上。 　　1.2.2.2试剂盒与检测方法：使用的是实时荧光PCR仪（美国应用生物公司生产，型号：7300），用H1N1型和甲型流感通用型的病毒核酸双检试剂盒（上海科华生物工程股份有限公司提供），核酸提取的试剂盒采取自行配置，采取荧光PCR法进行检测；皆按照试剂盒上说明书进行严格操作，仅配置一种反应液，其检测通道是VIC（F1uA信号）与FAM（H1N1RNA信号），在严格质控下完成操作。 　　1.2.3结果判断以阴阳性的对照皆成立作为前提条件，Ct值为无数值或者超过40，认为呈阴性反应；Ct值在36-40时，给予重新检测；Ct值的FluA为阳性或者在36以下，认为呈阳性反应［1］。 　　1.3统计学方法本组检出率、灵敏度、特异性及准确率的数据采取SPSS13.0软件进行统计学处理，期间的数据比较使用t检验，χ±s作为计量单位；结果时间及检测费用的数据采取卡方软件V1.61版本进行统计学处理，期间的数据比较使用X2检验，%作为计量单位，以P＜0.05为有统计学意义。 　　2结果 　　268例样本中，荧光定量PCR单探针法检出阳性率为76.9%（206/268），双探针法检出阳性率为75.7%（203/268），两种方法的检出率对比无明显差异（P＞0.05），无统计学意义；对两种方法的检出阳性的样本病例随访一个月，最终得到临床确诊的有203例，进行荧光定量PCR单探针法检测漏诊3例，灵敏度为98.5%，无误诊案例，特异性为100%，准确率为98.5%；双探针法检测漏诊5例，灵敏度为97.5%，误诊5例，特异性为97.5%，准确率为95.1%，两种方法检测的灵敏度、特异性及准确率相对皆无明显差异（P＞0.05），无统计学意义。两种方法检测的出结果时间及检测费用对比有明显差异（P＜0.05），具有统计学意义，见表1、表2。 　　3讨论 　　流感病毒是一种传播速度极快，且容易引发大流行的一种疾病，以甲型流感病毒的传染性及感染能力最强，具有较大的危害性