血必净对急性肺损伤兔模型中NF—κB信号通路影响及其临床意义.docVIP

血必净对急性肺损伤兔模型中NF—κB信号通路影响及其临床意义 　　[摘要] 目的 观察血必净对急性肺损伤（ALI）兔模型核因子-κB（NF-κB）信号通路的影响及其对ALI的治疗作用。 方法 选择新西兰兔80只，按随机方法分为四组：空白对照组、单纯急性肺损伤（LPS）组、单纯血必净（XBJ）组、血必净治疗组（LPS+XBJ），并给予相应的治疗，于12、24、36、48 h分批处死后分离肺组织后，采用凝胶电泳迁延率法（EMSA）加计算机辅助图像分析技术检测白细胞NF-κB活性。 结果 与空白对照组相比较，LPS组各时间点肺组织NF-κB表达量均明显增高（P 0.05）。 结论 NF-κB参与了急性肺损伤过程，血必净能抑制NF-κB的表达，从而对肺组织起到保护作用。 　　[关键词] 血必净；急性肺损伤；NF-κB 　　[中图分类号] R563.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2012）10（c）-0019-02 　　急性肺损伤（ALI）是常见的急危重症。ALI的基本发生机制为细胞因子的过度表达及相互之间的复杂作用，使肺毛细血管通透性增加，液体、溶质和细胞成分迁移至间质及肺泡腔，产生肺水肿[1]。ALI目前尚无特异治疗方法，在众多细胞因子中，核因子-κB（NF-κB）调控多种细胞因子和炎症介质的转录表达，在ALI的发病过程中发挥着重要作用。本研究基于中医学理论及笔者的临床经验，结合现代医学研究进展，通过制备内毒素型急性肺损伤兔模型，观察中药制剂血必净注射液对ALI肺组织NF-κB的活性变化，探讨血必净注射液是否通过拮抗内毒素、抑制炎性介质释放和保护内皮功能等机制而发挥治疗作用，为中西医结合方法治疗ALI提供理论依据，提高抢救成功率。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　脂多糖、内毒素脂多糖（LPS）及试剂盒购自广州晶美生物技术有限公司（代理美国Sigma公司产品）。NF-κB的同源结合序列由北京奥科生物技术公司合成并行末端生物素标记。血必净注射液由天津红日药业股份有限公司提供，批准文号：每支10 mL。有效成分是由中药原料药红花、赤芍、川芎、丹参、当归中提取，其提取物的有效成分包括红花黄色素A、川芎嗪、丹参素、阿魏酸、芍药苷、原儿茶醛等。其中红花黄色素A浓度0.5 mg/mL，芍药苷浓度1.0 mg/mL，阿魏??浓度0.01 mg/mL。 　　1.2 动物模型及分组 　　1.2.1 分组 取新西兰兔80只（雄性），体重2.0～2.5 kg，按随机方法分为四组：空白对照组、单纯急性肺损伤（LPS）组、单纯血必净（XBJ）组、血必净治疗（LPS+XBJ）组，各20只。 　　1.2.2 动物模型制作 1%戊巴比妥钠40 mg/kg腹腔麻醉，经耳缘静脉注入内毒素LPS，制成急性肺损伤的动物模型。 　　1.2.3 干预方法 空白对照组给予生理盐水10 mL注射，LPS组仅注射LPS 5 mg/kg，XBJ组仅注射血必净5 mL/kg，LPS+XBJ组注射LPS 5 mg/kg+血必净5 mL/kg静脉注射。 　　1.3 观察指标及标准 　　1.3.1 血流动力学变化 通过生物多导仪观察实验前后血流动力学变化，包括呼吸频率、心率、体温、动脉和静脉氧分压、体重等，在所需观察时间内抽取血液标本。 　　1.3.2 动物模型制作成功的病理指标 LPS致伤后半小时处死动物，肺脏体积增大，表面可见大小不等的暗红色斑片状病灶，切面可有淡红或白色泡沫样液体溢出；光镜下观察，肺组织内有白细胞浸润，可见肺间质及肺泡水肿，肺出血明显。肺组织湿/干（W/D）比值明显升高。 　　1.3.3 肺组织病理形态变化 于12、24、36、48 h分批处死后分离肺组织后，取右肺组织进行组织切片在光镜、电镜观察病理形态变化。 　　1.3.4 NF-κB活性测定 分离左肺组织，采用4℃生理盐水进行左肺灌洗，收集灌洗液，取摇匀的灌洗液原液1滴，作细胞总数计数。灌洗液离心，细胞沉渣涂片做Wrigh-Giemsa染色，镜下分类，计数巨噬细胞、中性粒细胞（PMN），采用凝胶电泳迁延率法（EMSA）加计算机辅助图像分析技术检测白细胞NF-κB活性（按试剂盒说明操作）。 　　1.4 统计学方法 　　使用SPSS 12.0统计软件进行分析，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，重复测量的计量资料采用方差分析，样本均数之间的两两比较用q检验。以P 0.05）。见表1。 　　3 讨论 　　既往临床报道显示，接近半数的脓毒症患者发生ALI，进而发展成为急性呼吸窘迫综合征（ARDS），后者为脓毒症患者的主要死因之一。ALI发生时，肺组织中炎性因子大量表达，参与ARDS的发生发展。NF-κB是一组可被数百种上游因子激活的多效因子，其通过多条信号