Dendritic Cell 课件PPT.pptVIP

临床免疫应用 DC在机体的免疫系统中扮演了一个重要角色，是最有效的专职抗原提呈细胞，在抗血液系统肿瘤的治疗中具有突出的优势。 在GM-CSF及IL-4的共同作用下，DC迅速发展为成熟的DC，可表达丰富的MHC-I及MHC-II类分子，提呈丰富的肿瘤抗原肽，使相应T细胞的TCR被充分占据，同时DC提供了高水平的B7-1、B7-2、CD40分子，有利于DC与其它免疫细胞间的信息传递。DCT IL-12 Th1型的应答，利于肿瘤病灶的清除DC可以分泌趋化因子，专一性趋化初始T细胞，促进T细胞聚集，增强对T细胞的激发。 临床免疫应用 应用DC 的免疫激活作用和诱导免疫耐受的特点，可将DC 用于某些疾病的治疗，如用病原体抗原在体外致敏DC，通过过继回输的方式激活免疫应答，以治疗多种感染性疾病、应用肿瘤抗原致敏的DC 回输机体以治疗肿瘤等；在移植免疫中，供体的非成熟DC 倾向于诱导免疫耐受，而成熟DC 倾向于引发免疫排斥。因此，若预先去除移植物中DC 或用非成熟DC 诱导同种免疫耐受，均可延长同种移植物的存活时间；DC 在自身免疫性疾病和变态反应性疾病发生发展中起一定的促进作用，阻断或降低DC 的APC 功能，或用非成熟DC 诱导特异性外周免疫耐受，可以达到防治此类疾病的目的。 DC肿瘤疫苗 肿瘤常规治疗主要是外科手术、放疗、化疗等方法，其失败的主要原因是因为其疗效的非特异性，无法根除远处转移的微小病灶，而肿瘤免疫疗法的主要目的是要发展肿瘤疫苗，诱导机体的免疫系统来识别和清除其微小转移灶。这种肿瘤疫苗被称为治疗性疫苗。肿瘤抗原的免疫原性往往很弱，为了增强机体的免疫应答，将 自身的DC进行培养并将肿瘤抗原导入DC，可以激发对肿瘤细胞的免疫反应，此即为以DC为基础的肿瘤疫苗。 DC肿瘤细胞性抗原疫苗 DC肿瘤多肽抗原疫苗 DC肿瘤抗原mRNA疫苗 DC基因修饰疫苗 DC亚细胞结构肿瘤疫苗 DC疫苗注射途径对诱导全身性免疫应答意义重大 。 Fong等认为，皮内和淋巴管内注射DC诱导Th1细胞介导的免疫应答频率比静脉注射高，后者诱导特异性抗体频率和滴度明显比前二者高。 免疫反应监测 用于检测特异性免疫应答的方法有细胞毒性试验、流式细胞仪检测效应性细胞因子释放、酶联免疫斑点法、四聚体技术等。 Part Six In vitro culture 树突状细胞的体外培养 使血液中单核细胞分化成树突状细胞 基本原理 应用GM-CSF 和IL-4 使血液中单核细胞分化成树突状细胞，并用IFN-α促进树突状细胞的成熟。 试剂和材料 新鲜的外周（肝素）抗凝血液 淋巴细胞分离液。无钙镁HanKs(CMF-HanKs)液 制剂：人重组GM-CSF(hrGM-CSF)。hrIL-4 hr IFN-α。 培养液： （1） RPMI1640 全培基：RPMI1640 10% 胎牛血清（ FCS、热灭活） 2mmol/LL-谷氨酰胺 100IU/ml 青霉素 100μg/ml 链霉素 1g/L 非必需氨基酸 1 mmol/L 丙酮酸钠 5×105 mol/L 2 巯基乙醇。 （2） RPMI1640/IL-4/GM-CSF:即RPMI 全培基 IL-4(40ng/ml) GM-CSF(50ng/ml) （3） RPMI1640/IFN-α:即RPMI 全培基 IFN-α（1 ~ 10ng/ml）。 器皿及仪器 培养瓶（25ml 75 ml）CO2 孵箱、光学显微镜、血细胞计数器、垂直气流超净台、离心机等。 使血液中单核细胞分化成树突状细胞 实验操作 1、制备单核细胞 2、将单核细胞培养基在含GM-CSF 和IL-4 的RPMI1640 培基液中，细胞浓度为1×106 /ml，置5%CO2孵箱中， 37℃孵育3天。 3、培基第3 天换液，轻轻吸去原培养液，加入等量含有IL-4 和GM-CSF 的新鲜1640 培氧液，继续置CO2 培养。 4、促树突状细胞成熟：单核细胞经与IL-4 和GM-CSF 的共同孵育，7 天左右使其分化成树突状细胞，但并未成熟。此时轻轻吸去含有IL-4 和GM-CSF 的1640 培养液，更换等量的含有IFN-α的RPMI1640 培养液，继续置5%CO2 孵箱中，37℃培养，至第9 天时可获得成熟的树突状细胞。 DC的鉴定及记数标志 由于尚没有鉴定出DC 的特异性分子标志，目前只能通过形态学、组合性细胞表面标志、在混合淋巴细胞反应（MLR）中能刺激初始T 细胞增殖等三个方面加以综合判断。 当然，也有数种DC 相对特异性标志得到人们的公认和应用，例如33D1 和NLDC145 是小鼠DC 比较特异性的标志；人DC 的主要特征性标志为CD1a、CD11c 和CD83。 CDla主要表达于胸腺细胞和DC，是鉴定人外周血与骨髓中DC