《全自动电泳仪》ppt课件.ppt

琼脂糖凝胶蛋白尿电泳图谱 病理蛋白尿的分型及诊断 ㈠肾前性蛋白尿 肾前性蛋白尿常是由于高血压、高烧、心脏功能衰竭等原因所致。另一些情况血浆中高浓度蛋白，使得肾小球超负荷滤过及肾小管重吸收的相对减低，从而过量地出现于尿中。 ㈡肾性蛋白尿 1. 肾小球损伤的特征：由于肾小球滤膜的损伤，引致大分子蛋白分子透过滤膜，而肾小管无法将大分子蛋白重吸收，终尿可发现大中分子蛋白，主要包括：白蛋白、转铁蛋白、IgG、IgA、IgM、α2巨球蛋白、触珠蛋白； 2. 肾小管损伤的特征：由于肾小管受损，重吸收功能障碍，由于肾小球功能完好，大分子未被滤过，终尿可发现小分子蛋白，主要包括：β2微球蛋白、视黄 醇结合蛋白、轻链、α1微球蛋白、溶菌酶及少量的白蛋白； 3. 混合性损伤：即肾小管、肾小球同时受损，终尿可发现上述所有分子。 肾小管蛋白尿 肾小球损伤 混合性蛋白尿 ㈢肾后性蛋白尿 可见于泌尿道上皮细胞分泌蛋白进入尿中，以及泌尿道损害引起血浆蛋白渗入尿中，像泌尿系的炎症等。泌尿道的损害常引起血尿和蛋白尿，这种蛋白尿可能不存在肾小球滤过和肾小管重吸收方面的改变。 溢出性蛋白尿 光密度仪扫描结果 电泳技术与自动化 电泳是指带电荷的溶质或粒子在电极的作用下在液体介质中的泳动。 ㈠电泳技术的分类 ?1、基础的电泳技术 ⑴淀粉凝胶电泳 ⑵琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳是一种实用的电泳技术。它用的介质是一种纯化的、主要是中性部分的琼脂，即琼脂糖。这一技术已成功能应用到血清蛋白、血红蛋白、乳酸脱氢酶及肌酸激酶、脂蛋白等物质的分离。琼脂糖优点是对蛋白质的亲和力低，干燥后透明度高，便于密度检测。 ⑶醋纤膜电泳 ⑷圆盘电泳 ⑸聚丙酰胺凝电泳 ⑹等电聚焦电泳 ⑺二维电泳 ⑻高分辨电泳 1、毛细管电泳 2、与免疫学技术结合衍生出的电泳技术 ⑴免疫电泳 ⑵交叉免疫电泳 ⑶对流免疫电泳 ⑷免疫固定电泳 广泛用于蛋白质的鉴定。它是免疫蛋白混合液在琼脂糖凝胶上进行电泳，再在胶上直接加入相应抗血清，抗原抗体复合物沉淀下来。这些免疫沉淀物在凝胶上固定下来，不沉淀的蛋白质在胶上可以洗脱。对凝胶进行染色，即可将蛋白质鉴定出来。目前广泛应用于骨髓病蛋白的评价上。 ㈡电泳技术与自动化 1、电泳系统：HYDRASYS全自动电泳系统，以琼脂糖凝胶为载体，自动点样、电泳孵育、染色、脱、烘干。采用微孔滤纸渗透的专利点样技术，电脑程控化管理，快捷简便的人机对话 2、HYRYS-PHORFSIS光密度扫描仪，程序化多功能全自动学密度仪。 血清蛋白电泳 血清蛋白质在一种指定的缓冲液，直流电场中，每种蛋白质按各自的速度迁移，根据它们所带的电荷而分离。 ㈠正常血清电泳分离出5个区带： 白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白。 每个区带含1种或多种血清蛋白成分。 按迁移递减次序排列依次是 1、白蛋白:迁移最快，最大的部分，靠近凝胶的阳极 2、α1球蛋白:相当于α1-抗胰蛋白酶及血清类粘蛋白 3、α2球蛋白:相当于：触珠蛋白、α2巨球蛋白、血浆铜蓝蛋白、GC球蛋白及α脂蛋白 4、β球蛋白:相当于：转铁蛋白、β脂蛋白及补体、特殊情况下，可迁移成清晰的β1和β2带。 5、γ球蛋白:相当于血清免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA） 图谱(正常) ㈡特殊情况 1、单克隆免疫球蛋白病 出现异常的尖峰，通常出现迁移到γ区，但有时迁移到β或α2区。但并非所有的单克隆免疫蛋白均为恶性型的。 单克隆免疫球蛋白电泳图谱 本周蛋白(免疫固定电泳) 2、非恶性型或独特型γ球蛋白病有下列特征 ①??? 单克隆的峰值弱小 ②??? 单克隆组分的浓度整个过程无变化 ③??? 多克隆免疫球蛋白不减少 ④??? 本周蛋白很少出现 此类病人可检测免疫固定电泳，确定为哪类单克隆免疫球蛋白且必须有规律地监控这类病人 3、年龄变化 :10到16岁以前，γ球蛋白未达到正常水平。达到40岁时，白蛋白和γ球蛋白通常增加。 4、脐带的表现:白蛋白减少，β和α2球蛋白减少。γ球蛋白正常（主要来自母体） ㈣白蛋白区带的改变 1、双白蛋白血症 遗传性变异、大剂量β酰胺类抗生素治疗、胰蛋白酶对白蛋白内部水解所致胰腺炎 2、近乎完全缺乏区带 先天性白蛋白缺乏症 3、白蛋白减少 4、高白蛋白血症 血液浓缩 ㈤α1球蛋白区带的改变 ①减少 肝功能衰竭、营养不良、蛋白丢失、先天性α1抗胰蛋白酶缺乏 ②增多 炎症，常伴有α2球蛋白 ㈥α2球蛋白区带的改变 1、双区带现象 结合珠蛋白表型差异、单克隆性游离轻链迁移 2、减少 肝功能衰竭、营养不良、蛋白丢失、血管内溶血结合珠蛋白下降 3、增多 炎症综合征、肾病综合征 ㈦?球蛋白区带改变 1、减少 肝功能衰竭、低补C3 2、增多 非单