手性药物去甲肾上腺素对映体的效毛细管电泳-电化学分离检测.ppt

2002学年创新实验总结报告 手性药物去甲肾上腺素对映体的高效毛细管电泳-电化学分离检测 报告人：许迪明 指导教师:谢天尧 手性药物去甲肾上腺素对映体的毛细管电泳-电化学分离检测 摘要： 本文报道了以未涂层融硅石英毛细管（50cm×75μm）为分离柱，5mmol/L NaOH + 8mmol/L Citric acid +8mmol/L b-CD 为电泳介质，分离电压12.5KV，检测电压0.80V，建立的去甲肾上腺素对映体高效毛细管电泳-方波安培分离检测方法。对分离过程中使用的缓冲溶液种类、浓度、pH、分离电压对拆分效果的影响进行了讨论，并对拆分机理进行了探讨。 手性药物在医学领域中的作用越来越被人们重视。在含有对映异构体的药物中，一种异构体是药物的有效组分，而另一种则可能低效，无效乃至有毒，所以美国食品与药物管理局出台了手性药物的管理法规，并引起国际上对手性药物分离分析的重视（1）。手性化合物分离检测的常用方法有高效液相色谱（HPLC），气相色谱（GC），超临界流体（SFC）和毛细管电泳（CE）。近年来，毛细管电泳手性分离技术引起了人们的重视，并得到了快速发展。 目前，有关采用毛细管电泳分离手性药物报道中以光学检测为多，电化学检测的应用很少。毛细管电泳—电化学检测，尤其是安培检测，可使用极细孔径的毛细管而不会造成灵敏度的损失，具有灵敏度高、线性范围宽、设备简单价廉、易于微机化和微型化，而被认为是CE的极具潜力的检测方法。近年来随着制约其应用的关键技术的突破，其应用潜能正在得到发挥，与其它类型的检测器相比，具有自身的特点和优势，已发展成为一种重要的分离分析方法，将在手性药物拆分方面有较大的应用前景。 去甲肾上腺素(Noradrenaline)是一种急救药，具有很强的血管收缩作用，使全身小动脉与小静脉都收缩(但冠状血管扩张)，外周阻力增高，血压上升。临床上主要利用它的升压作用，静滴用于各种休克(但出血性休克禁用)，以提高血压，保证对重要器官(如脑)的血液供应。 ，结构式见图1。去甲肾上腺素是手性分子，含R型和S型。本文首次采用高效毛细管电泳—方波安培检测法，以5mmol/LNaOH+8mmol/L Citric acid+8mmol/L b-CD 为电泳介质，实现了去甲肾上腺素对映体的分离检测，取得了满意的结果。 去甲肾上腺素分子结构图 1. 主要仪器和试剂 CES2000毛细管电泳仪（高压电源，安培检测器，毛细管电泳数据工作站，中山大学化学与化工学院研制）；PHS-3C型酸度计（上海伟业仪器厂）；石英毛细管（50cm×75μm i.d.,河北永年光导纤维厂）。CQ-2B型超声波清洗器（明珠电器有限公司）。 去甲肾上腺素（上海禾丰制药公司产品）；b-CD（中国医药集团上海化学试剂公司产品）；氢氧化钠（广州化学试剂厂）；柠檬酸（Citric acid, 广州化学试剂厂）；所用试剂均为分析纯，水为二次石英重蒸水。 2. 缓冲液和样品溶液 分别配制100 mmol/L 柠檬酸、氢氧化钠；25 mmol/L b-CD储备液。实验时，按要求量取适量储备液制得不同浓度和不同pH的电泳运行缓冲液。去甲肾上腺素对映体配成2mg/mL的储备液，进样时用缓冲溶液稀释到所需浓度。 3. 实验方法 连接好毛细管电泳仪和检测装置，毛细管柱在使用前依次用0.1mol/LNaOH ，蒸馏水和运行液各冲洗约5min。检测电极用超声波进行冲洗。当更换运行液或进样4次以后，也需按上述步骤清洗毛细管和电极。进样方式采用重力进样，要求进样端与检测端的高度差为20cm，进样时间为10s。方波安培检测器的输出信号经数据工作站采集到微机中，进行实时数据处理、图形显示和数据文件存储。实验在恒温（25 ? C），恒湿（70%）的实验条件下进行。 3.1 b-CD浓度的影响 b-CD是手性选择剂，是对映体分离的主要因素，它的浓度直接决定了分离效果，不同浓度的b-CD对两个对映体分离的分离效果不同。高浓度和低浓度的b-CD对手性分离的机理也有变化。高浓度的b-CD由于非特异性疏水作用和b-CD的二聚作用导致手性识别能力。低浓度的b-CD与两对映体的作用互相竞争。b-CD的浓度也影响了底液的性质，使毛细管电泳的推动力电渗流产生变化，改变了对映体的分离性。 1 b-CD浓度的影响 实验也证明了这一点，图2－A是b -CD的时浓度为4mmol/L时的分离效果图，可以看出两个对映体还没有明显分开；图2－B是b -CD的时浓度为8mmol/L时的分离效果图，此时