手性药物的液色谱分析.ppt

手性药物的液相色谱分析 万 金 志 中山大学药学院 药物分析与质量评价实验室 2004-11 。 手性药物(ｃｈｉｒａｌｄｒｕｇｓ)通常是指组成原子相同,但立体结构呈手性关系的药物.手性药物的研发不仅涉及制备和分析对映异构体的方法,而且涉及对映体之间在药动、药效、毒理以及临床效果上的差异,或者相互作用研究。目的是提供更有效、更安全的药物上市。天然或半合成药物几乎都有手性,98%以上为光学活性物质;全合成药物中40%为手性药物,而且目前常用的700多种药物至少一半含有一个手性中心,其中90%为外消旋体。1980年版的美国ＰｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌＤｉｃｔｉｏｎａｒｙｏｆＤｒｕｇＮａｍｅｓ中统计了486个合成手性药物,其中398个是消旋体,仅88个（不到19%）是单一对映体药物。1984年荷兰药理学家Ａｒｉｅｎｓ极力提倡手性药物以单一对映体上市,抨击以消旋体形式进行药理研究以及上市。他的一系列论述的发表,引起药物部门广泛的重视。 1. 手性性药物药效学的差异 Ⅲ.　代谢　药物不同光学体的立体选择性代谢主要部位在肝脏,肝内的药物代谢酶作用于手性药物体内生物转化过程。Ｐ 450基因超家族具有遗传多态现象。目前已知的有12个亚族,涉及大多数药物代谢的酶主要有ＣＹＰ1,ＣＹＰ2,ＣＹＰ3三大家族,具体药酶是ＣＹＰ1Ａ2,ＣＹＰ2Ｃ8,ＣＹＰ2Ｄ6,ＣＹＰ3Ａ4等。由于ＣＹＰＳ的遗传多态性阐明了为什么不同光学活性的药物在人群中不良反应发生的质和量的不同。ＫＲＯＥＭＥＲ等发现在人体内Ｒ 普罗帕酮(Ｒ ｐｒｏｐａｆｅｎｏｎｅ)可减弱Ｓ 普罗帕酮(Ｓ ｐｒｏｐａｆｅｎｏｎｅ)的代谢。体外微粒体孵育实验也证明,Ｒ 普罗帕酮能竞争抑制Ｓ 普罗帕酮的代谢清除,可导致服用消旋体比等量Ｓ 普罗帕酮表现出更明显的β受体阻滞作用。Ｒ体对Ｓ体的代谢清除抑制作用将使其β受体阻滞作用更明显,容易引起有关不良反应。 三点作用模型 对手性衍生化试剂的要求：高光学纯度。常用的手性衍生化试剂：羧酸衍生物类、胺类、异硫氰酸酯类、异氰酸酯类、萘衍生物类、光学活性氨基酸类、固相衍生化试剂。 对于β-CD而言,外表面有7个伯羟基位于空腔的细口端,14个仲羟基位于空腔的阔口端,其中7个羟基指向顺时针方向,另外7个羟基指向逆时针方向。空腔内部只有氢原子及糖苷氧原子,具有疏水性,而空腔端口的羟基使CD外部具有亲水性。 每个葡萄糖单元有5个手性碳原子,这种结构因素能对手性化合物起到识别作用。而端口羟基的衍生化不仅可以改变CD的亲水性,而且对CD空腔的形状也有很大的影响。这些结构及性质的改变更加扩大了CD的应用范围。 五、手性药物的HPLC分析 2.手性流动相添加剂(ＣＭＰＡ)法 　 向流动相中加入一手性试剂,它与溶质常以氢键、离子键或金属离子的配位键生成非对映体缔合物,利用手性试剂与药物消旋物中各对映体结合的稳定常数不同，以及药物与结合物在固定相上分配的差异，从而以常规ＨＰＬＣ固定相实现对映体的分离。 根据光学活性试剂与对映体化合物相互作用的方式,可把常用的ＣＭＰＡ分为 3 类。 环糊精类 流动相添加剂 手性离子对试剂 配合交换剂 吸附型手性固定相（absorption CSP） 早期为天然吸附剂如淀粉、石英，后来为葡聚糖、纤维素，现为环糊精、蛋白质、聚酰胺（手性）、聚丙烯酰胺（手性）等。其机理是利用对映体与固定相之间在氢键、静电力及疏水力的差别而拆分。“三点手性识别模式”是解释对映体差别的理论基础（为什么要三点？）。吸附型手性固定相中具有代表性的是环糊精。 环糊精是6～12个D（＋）葡萄糖单元通过α-（1-4）连接而成的环形寡聚糖。 α-环糊精对小分子对映体有拆分作用；γ-环糊精无拆分作用；β-环糊精可以进行单环、双环及三环对映体的分离， β-环糊精通常是通过一定长度的碳链键合到硅胶表面而制成。 手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用， 这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空