生物化学基因表达与调控(第十二章)PPT.ppt

第十二章基因表达与调控;DNA复制的定义、特点（方式、方向、酶）、过程（起始、延长、终止）； 逆转录酶及逆转录现象。 RNA转录的定义、特点（方式、方向、酶、蛋白因子）、过程（起始、延长、终止）；RNA转录后修饰。 翻译的定义、特点（合成体系、几种RNA的作用、方向、酶、蛋白因子）、过程（起始、延长、终止）；新生蛋白质的转运及加工。 基因表达的调节控制。 教材第34、36、37、38、39章; 中心法则：; 第一节 DNA复制的特点;2、复制方式 ： P407图;;;4、双向复制： P408;5′;5、复制方向： 5’→3’;半不连续复制（semi-discontinuous replication）：;6、复制起始于RNA引物的合成;三、参与DNA复制的酶及蛋白因子;（2）拓扑异构酶（topoisomerase）：;引发体成分;;催化dNTP聚合到核酸链上，是依赖DNA的DNA聚合酶。 （DNA聚合酶的反应特点,p413-414）;原核生物：DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(PolⅠ、Ⅱ、Ⅲ)，比活最大起真正复制作用的是PolⅢ ，含量最多的是 PolⅠ，这三种酶都属于具有多种酶活性的多功能酶。 （p416表31－2）;polⅠ是单一肽链的大分子蛋白质,可被蛋白酶水解为两个片段，其中的大片段称为Klenow fragment （Mr68000），具有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶的活性。小片段（Mr35000）具有 5’→3’外切酶的活性。;DNA pol I降解RNA引物的同时合成DNA填补空隙，这种同时合成和降解的过程称为切口平移（nick translation），其效果是合成方向中切口的移动。;polⅢ由十种亚基组成，其中α亚基具有5’→3’聚合DNA的酶活性，具有复制DNA的功能；而ε亚基具有3’→5’外切酶的活性，与DNA复制的校正功能有关。（p417表34－3，图34－16) ;DNA聚合酶校正反应： ;真核生物：DNA聚合酶α、β、γ、δ、ε。 α、δ在复制中起主要作用。（p425表34－5）;连接DNA链3’-OH末端和另一DNA链5’-P 末端，使二者生成磷酸二酯键。;作用：冈崎片段的连接；引物水解留下的空缺由PolⅠ催化填补，连接酶缝合缺口；DNA修复、重组、剪接。;; 第二节 DNA复制过程;×;二、复制的延长;*;1、去除引物，填补缺口： 在原核生物中，由DNA聚合酶Ⅰ水解去除RNA引物，并催化延长引物缺口处的DNA，而在真核生物中，RNA引物的去除，由一种特殊的核酸酶来???解，而冈崎片段由DNA聚合酶ε来延长。;.;E.Coli中的ter（terminus）区组织，含有5个非对称的ter部位，与Tus （terminus utilization substance，终止子利用物质）结合成Tus-ter复合物，通过阻止解旋酶解旋DNA来封闭复制叉的通路。;;四、真核生物的端粒;; 端粒酶的结构 ;;五、逆转录现象 （p493）;将逆转录病毒RNA转换成DNA的最关键酶是逆转录酶（reverse transcriptase）。该酶具有Rnase H活性（降解RNA活性）和DNA聚合酶活性（RDDP、DDDP）。 逆转录酶没有3’-5’外切酶活性或校正活性，它的错误率比任何DNA聚合酶都高，例如人免疫缺陷病毒I（human immune deficiency virus I, HIV I）逆转录酶每合成2000到4000核苷酸就会掺入一个不正确的碱基，说明HIV I的高突变率。;;逆转录病毒的生活循环;;六、聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）;;PCR技术的应用;七、原核生物与真核生物DNA复制比较：;第三节 DNA的损伤与修复 ;;由紫外线、电离辐射、X射线等引起的DNA损伤。其中，X射线和电离辐射常常引起DNA链的断裂，而紫外线常常引起嘧啶二聚体的形成，如TT，TC，CC等二聚体。这些嘧啶二聚体由于形成了共价键连接的环丁烷结构，因而会引起复制障碍。 ; 脱氨剂：如亚硝酸与亚硝酸盐使C脱氨基生成U，A脱氨基生成I。 烷基化剂：如氮芥、乙基乙烷磺酸等是一类带有活性烷基的化合物，可提供甲基或其他烷基，引起碱基或磷酸基的烷基化，甚至可引起邻近碱基的交联。 DNA加合剂：如苯并芘，在体内代谢后生成四羟苯并芘，与嘌呤共价结合引起损伤。 碱基类似物：如5-FU，6-MP等，可掺入到DNA分子中引起损伤或突变。 断链剂：如过氧化物，含巯基化合物等，可引起DNA链的断裂。;;;2、DNA突变的类型： ; 同义突变：基因突变导致mRNA密码子第三位碱基的改变但不引起密码子意义的改变，其翻译产物中的氨基酸残