生物技术的免疫原性和免疫毒性PPT.ppt

生物技术药物的免疫毒性和免疫原性研究 Kaiyong LIU  华南农业大学 生物技术药物 生物技术药物 包括体内诊断、治疗与预防用途； 来源于细菌、酵母、昆虫、植物和哺乳动物细胞 蛋白质、多肽及其衍生物、核酸 如细胞因子、生长因子、融合蛋白、酶、激素、单抗、载体等 特殊性 结构、生产工艺、保存条件、同源性、作用靶点明确等固有的特点 免疫毒性/免疫原性 免疫毒性 是指受试品引起免疫抑制或增强、过敏反应或自身免疫反应，可能与药理活性相关（如抗排斥药物）或不相关（如部分抗肿瘤药物）。 免疫原性 指药物刺激机体形成特异性抗体或致敏淋巴细胞的性质。 研究意义 意义重大：如 免疫抑制，感染↑，肿瘤↑ 免疫增强，放大自身免疫反应或过敏反应。 免疫原性，是药物本身具有的性质，有免疫原性不一定导致毒性，但可以影响对药物毒性、毒代或药效的客观评价。 但在规范及指导原则方面，缺乏共识，实验方法也不统一 免疫毒性研究内容一 常规的免疫毒性指标包括： 白细胞总数及其分类计数 球蛋白和白/球比值 补体水平 淋巴器官/组织的大体解剖 胸腺和脾脏的器官重量 免疫病理：胸腺、脾脏、引流淋巴组织 常规的免疫毒性检测结果 —引流淋巴组织检查 图　猴经口免疫HIV-BPV 假病毒后回肠粘膜下集合淋巴小结 Ａ Ｂ Ａ：对照组，Ｂ：高剂量组 常规的免疫毒性检测 —免疫抑制/增强 全血细胞变化、白细胞变化或淋巴细胞变化等。 免疫器官重量改变或组织学检查显示相关器官或组织细胞密度变化 血清免疫球蛋白变化 用药组感染发生率升高 用药组肿瘤发生率增多(除遗传毒性、激素效应或肝酶诱导外) 额外的免疫毒性试验内容 免疫功能检测 如T细胞依赖的抗体反应、NK细胞活性、CTL活性、细胞因子表达、巨噬细胞/中性粒细胞功能、皮肤超敏反应、宿主抵抗力研究） 免疫表型检测 依据免疫学理论和具体靶分子种类 额外的免疫毒性试验方案 增设卫星组、增加免疫学指标或改变给药方案等。 发育免疫毒性：在成年动物中发现免疫抑制作用后，需要评价发育免疫毒性作用，如观察母代暴露于药物后仔代的淋巴系统、血液系统、细胞因子等，两种以上功能检测等。不仅是免疫抑制！ 常规阶梯或分层或标准试验组合不一定合理，需个体化 额外的免疫毒性试验方法 免疫功能检测 Macrophage/Neutrophil 荧光标记的胶珠观察phagocytosis等 NK 反映天然免疫功能 TDAR SRBC or 钥孔血蓝蛋白 (KLH），用ELISA等 CTL 51Cr释放法，ELISPOT法 Cytokines ELISA法及胞内细胞因子检测 额外的免疫毒性试验方法 免疫功能检测 hypersensitivity 目前预测IV型变态反应 Buehler试验、豚鼠最大化试验（GPMT）、小鼠耳肿胀试验、小鼠局部淋巴结试验(LLNA) autoimmunity PLNA（报告抗原TNP-Ficoll、TNP-Ovalbumin） host resistance 抗感染或抗肿瘤发生（整体，必要时） 注：GPMT与人一致性约70%，LLNA约72% 额外的免疫毒性试验方法 免疫表型检测 常用流式细胞仪检测，检测表达水平和比例 Surface marker sIg+ PanB cells Thy 1.2+ or CD3+ Pan T cells、 CD4+CD8- T Helper/delayed-type hypersensitivity cells CD8+CD4- T Suppressor-cytotoxic cells CD8+CD4+ Immature T cells 免疫功能检测 —分泌IFNγ细胞 图　　猴经口免疫HIV-BPV 假病毒后外周血p24特异性的分泌IFN－γ的淋巴细胞数量 免疫细胞表型检测 —CD22阳性比例 图 食蟹猴静脉注射SM03嵌合抗体后CD22标记阳性细胞率的变化 CD22阳性细胞比例（%） 免疫细胞表型检测 —CD4/CD8比例 CD4/CD8比例 图 猕猴iv 4周 LHRHA-PE38后外周血CD4