生物化学课件 第二章 核酸2PPT.ppt

核酸和蛋白质的比较 核 酸 的 理 化 性 质 The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid 第 四 节 目 录 一、核酸分子具有强烈的紫外吸收效应 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 OD260的应用 目 录 二、核酸的变性(denaturation) 定义：在某些理化因素作用下，核酸双螺旋区域的氢键断裂，变成单链的过程。 方法：过量酸，碱，加热，变性试剂如尿素、 酰胺以及某些有机溶剂如甲醛等。 变性后其它理化性质变化： OD260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸碱滴定曲线改变 生物活性丧失 目 录 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂 例：变性引起紫外吸收值的改变 DNA的紫外吸收光谱 增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 热变性 解链曲线：如果在连续加热DNA的过程中以温度对A260（absorbance，A，A260代表溶液在260nm处的吸光率）值作图，所得的曲线称为解链曲线(melting curve) 。 Tm：解链过程中，紫外光吸收值变化ΔA260达到最大变化值的50%时的温度称为DNA的解链温度，又称融解温度(melting temperature, Tm)。Tm与G+C含量成正相关。 目 录 三、DNA的复性与分子杂交 DNA复性(renaturation)的定义 在适当条件下，变性DNA的两条互补链可恢复天然的双螺旋构象，这一现象称为复性。 减色效应 DNA复性时，其溶液OD260降低。 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing) 。 目 录 影响复性的因素 ① 样品的性质 ② DNA片段的大小 ③ DNA的浓度 ④ 温度 ⑤ 离子强度 在DNA变性后的复性过程中，如果将不同种类的DNA单链分子或RNA分子放在同一溶液中，只要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系，在复性时就可以形成杂化双链(heteroduplex)。 这种杂化双链可以在不同的DNA与DNA之间形成，也可以在DNA和RNA分子间或者RNA与RNA分子间形成。这种现象称为核酸分子杂交。 核酸分子杂交(hybridization) DNA-DNA 杂交双链分子 变性 复性 不同来源的DNA分子 第三节 RNA的结构与功能 Structure and Function of RNA 大多数天然RNA是一条单链，通过自身回折形成部分螺旋区，部分非螺旋区。 少数病毒RNA如水稻矮缩病毒、呼肠孤病毒、伤瘤病毒等RNA是双链螺旋，类 似于DNA的双螺旋结构。 RNA一级结构分子组成：A、U、C、G U H 二级结构基本元件 mRNA：是携带从DNA编码链得到的遗传信息，并以三联体密码子的方式指导蛋白质生物合成的RNA，由5 ’ 非翻译区、编码区和3’非翻译区组成。 一 、信使RNA的结构与功能 5’非翻译区 3’非翻译区 编码区 原核细胞的mRNA hnRNA 内含子 (intron) mRNA * 真核细胞mRNA成熟过程 外显子 (exon) * mRNA结构特点 1. 大多数真核mRNA的5′末端均在转录后加上一个7-甲基鸟苷，同时第一个核苷酸的C′2也是甲基化，形成帽子结构：m7GpppNm-。 首尾修饰 帽子结构 5′-cap：m7G(5′)pppNmp 5′-cap cap0: m7G(5′)pppNp cap1: m7G(5′)pppNmpNp cap2: m7G(5′)pppNmpNmpNp 帽子结构的类型 * mRNA结构特点 大多数真核mRNA的3′末端有一个多聚腺苷酸(polyA)结构，称为多聚A尾。 通常polyA长度从几十到几百个核苷酸不等，是由polyA转移酶加上去的。 mRNA核内向胞质的转移 mRNA的稳定性维系 翻译起始的调控 帽子结构和多聚A尾的功能 eIF4A 帽结合蛋白（CBPs) polyA结合蛋白(PAB) * mRNA的功能 把DNA所携带的遗传信息，按碱基互补配对原则，抄录并传送至核糖体，指导蛋白质的合成。 DNA mRNA 蛋白 转录 翻译 原核细胞 细胞质 细胞核 DNA 内含子 外显子 转录 转录后剪接 转运 mRNA hnRNA 翻译 蛋白 真