生物化学4 酶PPT.ppt

双倒数作图法 米氏方程两边取倒数： · 1 V = Km Vm 1 [S] + Vm 1 V= Vm [S] Km+[S] 1 V = Km+[S] Vm [S] 0 V 1 Km 1 [S] 1 Km Vm 斜率= 1 Vm (三) Km值和Vm值的测定 二、 酶浓度对反应速率的影响 [S][E]时, V=k3 [E] 酶浓度对反应速率的影响 V [E] 0 三、温度对反应速率的影响 最适温度: 酶促反应速率最快时的环境温度 四、pH对反应速率的影响 最适pH: 酶促反应速率最快时的环境pH 五、抑制剂对反应速率的影响 可逆性抑制作用 （reversible inhibition) 1.概念：凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质，称为抑制剂 2.类型： 不可逆性抑制作用 （irreversible inhibition) （一）不可逆性抑制作用 1. 概念 抑制剂通常以共价键与酶活性中心上的必需基团相结合，使酶失活 (不能用透析、超滤等方法除去) 2. 举例 (1)有机磷化合物 胆碱酯酶 + HO E + HX P RO R’O O X P RO R’O O O E 解磷定 PAM 解毒：二巯基丙醇（BAL） (2)重金属离子 如Hg2+、Ag+、As3+等 （二）可逆性抑制作用 抑制剂通常以非共价键与酶或酶－底物复合物可逆性结合，使酶活性降低或消失 概念 类型 竞争性抑制作用 非竞争性抑制作用 反竞争性抑制作用 1.竞争性抑制作用 抑制剂与酶的底物结构相似，可与底物竞争酶的活性中心，阻碍酶与底物结合形成中间产物 E + S ES E + P + I EI Ki 抑制程度取决于： 抑制剂与酶的相对亲和力与底物浓度的相对比例 底物、竞争性抑制剂与酶的结合部位 0 [s] 1 v 1 [I] 无抑制剂 Km 1 Km Vm [I] Km(1+ Ki ) 1 Km Vm (1+ Ki [I] ) 竞争性抑制 Vm 1 Vm不变 Km↑ 特点 (2)抑制程度取决于抑制剂与酶的相对 亲和力及与底物浓度的相对比例 (1)I与S结构类似，竞争酶的活性中心 (3) Vmax不变，Km增大 实例 H2N COOH H2N SO2NHR 对氨基苯甲酸 磺胺类药物 四氢叶酸 二氢叶酸合成酶 二氢叶酸 对氨基苯甲酸 四氢叶酸还原酶 (合成核苷酸) 2.非竞争性抑制作用 抑制剂与酶活性中心外的必需基团结合,底物与抑制剂之间无竞争关系,但酶-底物-抑制剂复合物（ESI）不能进一步释放出产物 I E + S ES E + P + ESI Ki + EI Ki + S I 非竞争性抑制剂与酶的结合部位 0 [s] 1 v 1 Km 1 Vm 1 无抑制剂 非竞争性抑制 [I] Vmax↓ Km不变 Vm (1+ Ki [I] ) 特点 (1)抑制剂与酶活性中心外必需基团结合，底物与抑制剂之间无竞争关系 (2)抑制程度取决于抑制剂的浓度 (3)Vmax降低，Km不变 3.反竞争性抑制作用 E + S ES E + P + I ESI Ki 抑制剂仅与酶和底物形成的ES结合，使ES的量下降。既减少从ES转化为产物的量，也同时减少从ES解离出E和S的量 第四章 酶 概 述 第一节 是由活细胞合成的对其底物有特异催化作用的蛋白质 酶(enzyme)： 核酶(ribozyme)： 具有高效特异催化作用的核酸，是一类新的生物催化剂，其作用主要参与RNA的剪接或DNA的连接 酶促反应：底物 　 产物 酶 一、酶的概念 二、酶的分类 1、氧化还原酶类 (oxidoreductases) 2、转移酶类 (transferases) 3、水解酶类 (hydrolases) 4、裂解酶类 (lyases) 5、异构酶类 (isomerases) 6、合成酶类 (ligases) 酶的分子结构与功能 第二节 维生素及其衍生物 金属离子 小分子有机化合物 各部分在催化反应中的作用： 酶蛋白决定反应的特异性 辅助因子决定反应的种类与性质 辅助因子 K+、Na+、Mg2+、 Cu2+、 Zn2+、Fe2+ 稳定酶的构象 传递电子 酶与底物的桥梁 降低反应中的静电斥力 转移基团 辅助因子分类（与酶蛋白结合紧密程度） 辅酶:与酶蛋白结合疏松 辅基:与酶蛋白结合紧密 金属激活酶：金属离子与酶的结合不甚紧密