第03章酶(4-5节)PPT.ppt

第三章　酶; 酶促反应动力学 (kinetics of enzyme- catalyzed reactions) 是研究酶促反应速度及其影响因素的科学。酶促反应的影响因素主要包括底物的浓度、酶的浓度、pH、温度、抑制剂和激活剂等。 ; 1902年，Henri在蔗糖酶水解蔗糖的实验中观察到：在蔗糖酶的浓度一定的条件下, 测定底物（蔗糖）浓度对酶 反应速度之间的关系呈现矩形双曲线 (rectangular hyperbola)。;; 在底物浓度很低时，反应速度随底物浓度的增加而急骤加快，两者呈正比关系，表现为一级反应。 随着底物浓度的升高，反应速度不再呈正比例加快，反应速度增加的幅度越来越小。 如果继续加大底物浓度，反应速度不再增加，表现为零级反应。此时，无论底物浓度增加多大，反应速度也不再增加，说明酶已被底物所饱和。所有的酶都有饱和现象，只是达到饱和时所需底物浓度各不相同而已。;反应初期，产物生成量极少，E+P→ES可忽略不计 [S] [E], [S]-[ES] ≈[S] 反应系统处于稳态平衡状态，即[ES] 形成速度等于[ES]的分解速度：d[ES]/dt＝－d[ES]/dt;; ES的形成速度： d[ES]/ dt＝k1[E][S] ES的分解速度： －d[ES]/dt＝(k2＋k3) [ES] 稳态平衡下， d[ES]/ dt＝－d[ES]/dt，即： k1[E][S] ＝(k2＋k3) [ES] 即：[E][S]/[ES]=(k2＋k3)/k1;令：;将[E]=[E]t－[ES]代入 　得： 　　　　　　　　 ；整理得： [ES]=[E]t[S]/(Km＋[S]);式中：Vmax指该酶促反应的最大速度，[S]为底物浓 度，Km是米氏常数，V0 是在某一底物浓度时相应 的反应速度。;从米氏方程可知： 当底物浓度很低时, [S] Km, 则 V0≈Vmax[S]/Km， 反应速度与底物浓度呈正比;;2、米氏常数的意义;(4) Km在实际中的应用;（D）判断酶的底物在体内具有的浓度水平：一般地，体内酶的天然底物的[S]体内≈Km，如果[S]体内 Km,那么V0 Vmax，细胞中的酶处于“浪费”状态，反之，[S]体内 Km，那么V0 ≈Vmax，底物浓度失去生理意义，也不符合实际状态。;4、Km求法;　 双倒数变换后的方程也称为Lineweaver-Buck方程（或双倒数方程） ;双倒数作图法;二、酶浓度的影响;三、温度对酶促反应速度的影响;;注意: 最适温度不是酶的特征常数，因为???种酶的最适温度不是一成不变的，它受到酶的纯度、底物、激活剂、抑制剂、酶反应时间等因素的影响。因此，酶的最适温度与其它反应条件有关。;四、pH对酶促反应速度的影响;胃蛋白酶和葡萄糖-6-磷酸酶的pH活性曲线;1.8; 动物体内多数酶最适pH值接近中性，但也有例外，如胃蛋白酶的最适pH约1.8，肝精氨酸酶最适pH约为9.8 (见下表)。 ; pH对酶促反应速度的影响机理;五、激活剂对酶反应速度的影响; 　通常，酶对激活剂有一定的选择性，且有一定的浓度要求，一种酶的激活剂对另一种酶来说可能是抑制剂，当激活剂的浓度超过一定的范围时，它就成为抑制剂。 ;六、抑制剂对反应速度的影响 ;(一) 不可逆性抑制作用 (irreversible inhibition) ;常见的不可逆抑制剂： 　 有机磷 　 有机汞 　 砷化合物 　 抗生素 　 氰化物;(二) 可逆性抑制 (reversible inhibition);1、竞争性抑制 (competitive inhibition);; 竞争性抑制剂双倒数曲线;对氨基苯磺酰胺 （磺胺类药） ;腺嘌呤;蝶呤 对氨基苯甲酸 Glu ;2、非竞争性抑制 (non-competitive inhibition) ;;1.;3、反竞争性抑制 ;;1.;;A：竞争性抑制作用 B：非竞争性抑制作用 C：反竞争性抑制作用;第三章　酶;一、变构酶与变构调节;（二）变构酶特点 ;;;1. 齐变模型（MWC, Monod-Wyman-Changeux model） 2. 序变模型（KNF, Koshlang-Nemeth6 and Filmer model） 相同点：认为酶的各亚基与底物结合存在两种形态即： 　　 Tight state: 紧张态，不利于底物结合 (T态) 　 　 Release state: 松弛态，有利于底物结合 (R态) 不同点：他们对酶由T态转为R态时是否一致存在分歧。;;二、同工酶 (isozyme，i