葛根多糖提取条件优化及其抗氧化活性研究.docVIP

葛根多糖提取条件优化及其抗氧化活性研究 　　摘要：采用乙醇回流法从葛根（Radix Puerariae）渣中提取葛根多糖，在单因素试验的基础上设计正交试验优化多糖提取工艺，并测定提取的葛根多糖的抗氧化活性。结果表明，优化的乙醇回流法提取葛根多糖的工艺条件为回流时间2.0 h、乙醇体积分数75%、料液比1∶40（m∶V，g/mL）、回流温度95 ℃，葛根多糖提取率为1.209%。提取的葛根多糖对O2—·和H2O2均有一定的清除作用，浓度为200 mg/L时，其对O2—·和H2O2的清除率分别为18.52%和13.68%。 　　关键词：葛根（Radix Puerariae）渣；多糖；乙醇回流法；抗氧化活性 　　中图分类号：O629.12 文献标识码：A 文章编号：0439—8114（2012）19—4344—04 　　葛根（Radix Puerariae）是多年生藤本植物野葛（Pueraria lobata）的根，始载于《神农本草经》，具有解肌退热、生津、透疹、升阳止泻等功效[1]。中国葛根资源极为丰富，除新疆、西藏、青海外，各省均有分布[2]。目前对葛根的研究和利用尚处于起步阶段，主要是从葛根中提取淀粉和黄酮类化合物，提取之后剩下大量的葛根渣。葛根渣含有大量粗纤维及多糖等营养成分，但是喂猪不消化，作肥不腐烂，随意倾倒又造成环境污染和资源浪费，加强葛根渣的综合利用是葛根加工业中一个亟需解决的重要问题。 　　大量药理及临床研究证实，多糖具有多种生物学功能，如降血糖作用[3]、提高机体的免疫功能[4]、抗辐射[5]、抗病毒[6]、抗肿瘤[7]、抗衰老[8]、抗氧化活性[9]、保鲜[10]、抗突变[11]等。本研究以乙醇溶液为提取溶剂，通过加热回流方式从葛根渣中提取多糖，优化提取工艺并测定其抗氧化活性，旨在为葛根多糖的综合开发利用提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器与试剂 　　试验仪器：UV—2102.PC型紫外可见分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司），SSW型微电脑电热恒温水槽（上海博迅实业有限公司医疗设备厂），电子天平（梅特勒—托利多仪器上海有限公司），微量移液器（上海荣泰生化工程有限公司），SHZ—III型循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）。 　　试验试剂浓硫酸、苯酚、葡萄糖、邻苯三酚、Tris等均为国产分析纯。 　　试验材料野生葛根渣取自上饶县???户，为葛根提取葛粉之后晒干的残渣。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 苯酚—硫酸法制作葡萄糖标准曲线[12] 分别取0.506 mg/mL葡萄糖标准液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL置于试管中，加水补至2.0 mL，另一试管加入2.0 mL蒸馏水作为空白对照。各试管分别加入60 mg/mL的苯酚1.0 mL，然后迅速加入98%的浓硫酸5.0 mL，摇匀，放置5 min，置沸水浴中水浴15 min。取出冷却至室温后于490 nm处测定其吸光度。以葡萄糖溶液的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。葡萄糖在0～0.253 0 mg/mL范围内浓度（X//mg/mL）与吸光度（A490 nm）呈良好的线性关系，回归方程为Y=5.814 2X+0.114 3，r=0.990 8。 　　1.2.2 单因素试验 准确称取干燥的葛根渣5 g，加入一定体积的乙醇溶液，在一定温度下加热回流一定时间后过滤，收集滤液，定容至100 mL，制得样液，参照“1.2.1”的方法测其吸光度，根据回归方程计算样品溶液中多糖的浓度，并计算葛根多糖提取率。设置单因素试验考察回流时间、加热温度、乙醇溶液体积分数和料液比对多糖提取率的影响。①回流时间。在回流温度80 ℃、料液比1∶20（m∶V，g/mL，下同）、乙醇体积分数80%的条件下分别回流0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h。②乙醇体积分数。分别采用体积分数75%、80%、85%、90%的乙醇作为提取剂，在回流温度80 ℃、料液比1∶20的条件下回流1 h。③料液比。回流温度80 ℃、分别按1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50的料液比加入体积分数80%的乙醇，回流1 h。④回流温度。按1∶40的料液比加入体积分数80%的乙醇，分别在80、85、90、95 ℃回流1 h。 　　1.2.3 正交试验 在单因素试验的基础上设计四因素三水平正交试验，进一步优化提取工艺，因素与水平见表1。 　　1.2.4 葛根多糖还原能力的测定[13] 　　1）对超氧阴离子自由基（O2—·）的清除作用。将按最佳工艺条件提取得到的多糖溶液配制成20、40、80、200 mg/L的溶液。取50 mmol/L pH 8.2的Tris—HCl缓冲溶液（含1 mmol/L EDTA）7.0 mL，加入1.0 mL去离子水，混匀后25 ℃水浴20