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5—HT 6基因多态性与阿尔茨海默病相关性研究 　　[摘要] 目的 探讨中国黑龙江地区汉族人群中5-HT6基因多态性与阿尔茨海默病（AD）的相关性。 方法 应用限制性片段长度多态性（RFLP）技术和聚合酶链反应（PCR），在95例正常对照人群和105例阿尔茨海默病患者中观察5-HT6基因多态性的分布，并探讨它们与阿尔获海默病之间的关系。 结果 在受试人群进行载脂蛋白E（ApoE）基因分型后，非ApoEε4型与ApoEε4型人群中AD与5-HT6受体基因各基因型或等位基因均无关联（P 0.05），AD组5-HT6受体基因和C/T基因型明显高于对照组，两组间差异有统计学意义（P 　　[关键词] 阿尔茨海默病；5-HT6基因；载脂蛋白E基因；相关性研究 　　[中图分类号] R749 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）06（b）-0013-03 　　阿尔茨海默病（Alzheimer disease，AD）是一种与年龄相关的神经系统变性病，又称老年性痴呆，其病因和发病机制不清，治疗效果不佳，发病后严重影响患者的生存质量[1]，因此受到越来越多的重视。据估计，2010年，全世界约有AD患者3560万，预计再过40年，每85人中就有1人为AD患者[2]。5-HT是中枢神经系统中比较重要的单胺类神经递质，参与人的感觉、运动和行为等许多生理过程[3]。目前，大量研究结果证实5-HT系统功能的改变可能参与了阿尔茨海默病的发病机制，5-HT6基因变异可能成为AD的危险遗传因素。为验证5-HT6基因多态性在AD病因学中的作用，本研究采用关联分析的方法，探讨5-HT6基因多态性与AD的关系。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　AD组105例，男66例，女39例，平均年龄（73.68±6.13）岁，平均发病年龄（71±8）岁，均为2009年3月～2013年3月齐齐哈尔医学院第一附属医院门诊及住院患者。对照组95例，男54例，女41例，平均年龄（72.96±8.45）岁，均为年龄、性别、文化程度与AD组相匹配的体检健康老年人。 　　1.2 方法 　　1.2.1 提取DNA 在患者住院的第2天凌晨抽取静脉血2 mL，EDTA抗凝，采用低渗溶血，分离白细胞，常规酚氯仿法提取DNA。 　　1.2.2 5-HT6 受体基因多态性检测 引物为：5-TGATCG-CGCTCATCACTCAG-3；5-CAGGATCCTGCAGATGGTGA-AGC-3[4]。 　　PCR反应参数为：95℃ 5 min，25个循环（94℃ 30 s，69℃ 30 s，78℃ 30 s），20个循环（94℃ 30 s，62℃ 30 s，70℃ 30 s），70℃ 5 min。取PCR产物10 pL，加10 U RsaⅠ内切酶，用37℃酶切5 h。用3.0%琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物。结果可显示复等位基因多态性，即267C/T。若267C为等位基因，则368 bp的PCR产物被酶切成249 bp和119 bp两个片断；如果267T等位为基因，则不被酶切，即仍为368 bp。载脂蛋白E（ApoE）基因型检测参照文献[5]。 　　1.3 数据处理 　　计算两组基因型频率及等位基因的分布，用Z检验计算其差异，并通过计算两组比值比（OR），对AD与5-HT6受体基因的各基因型以及等位基因进行相关性分析。 　　2 结果 　　2.1 5-HT6受体基因多态性与AD的关联性分析 　　AD组与对照组中5-HT6受体基因的各基因型及等位基因的频率分布及其与AD的关联性分析结果见表1。结果表明，AD与5-HT6受体基因多态性之间没有关联。 　　2.2 5-HT6受体基因多态性在ApoEε4型和非ApoEε4型人群中的分布 　　将各组研究对象分为ApoEε4型和非ApoEε4型两组，对AD与5-HT6受体基因的各等位基因和基因型进行关联分析（表2）。ApoEε4型和非ApoEε4型与5-HT6受体基因的各基因型或等位基因均无关联。 　　2.3 5-HT6受体基因多态性在非ApoEε4型和ApoEε4型AD患者中的分布 　　按是否含有ApoEε4基因将研究对象分为非ApoEε4型AD和ApoEε4型AD两组，并分别对两组AD患者与5-HT6受体基因各基因型及等位基因进行关联性分析（表3）。结果表明，非ApoEε4型与5-HT6受体基因267C/T基因型呈正相关。 　　3 讨论 　　AD是一种病因复杂的多基因疾病[6]，其患病率随着年龄的增长而增高，在我国，女性患病率高于男性、北方高于南方[7]。阿尔茨海默病的特征性病理包括：神经细胞内的神经原纤维缠结、选择性的神经细胞丢失和P-淀粉样蛋白的沉积[8]。AD相关的危险因素可归