Bcl—2、NF—KB在腮腺腺样囊性癌中表达及临床意义.docVIP

Bcl—2、NF—KB在腮腺腺样囊性癌中表达及临床意义 　　[摘要]目的：探讨Bcl-2和NF-KB在腮腺腺样囊性癌中的表达及意义。方法：应用免疫组化SP法检侧49例腮腺腺样囊性癌和20例正常腮腺组织中Bcl-2和NF-KB的表达情况，统计学分析采用χ2检验，P0.05），与TNM分期有关，Bcl-2和NF-KB两者存在正相关性（P 　　[关键词]腮腺；腺样囊性癌；Bcl-2；NF-KB 　　[中图分类号]R622 Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2013）12-1302-05 　　腮腺腺样囊性癌是一种常见的口腔颌面部恶性肿瘤，在腮腺恶性肿瘤的发病率中位居第二位，它的发病原因及机理不清[1]。该肿瘤的强浸润性、嗜神经侵袭性和极易早期发生血行转移的生物学行为导致了较差的预后，据统计术后10年生存率约20%，15年生存率只有10%左右[2]。随着医学研究的不断深入，专家学者们发现不仅细胞过度增殖可以引起肿瘤的发生，由细胞凋亡相关基因调控的细胞凋亡过程出现异常也可以引起肿瘤的发生[3]。Bcl-2是细胞凋亡相关基因的一个典型代表，也是当前细胞凋亡研究的热点之一，它通过延缓细胞增殖周期抑制细胞凋亡，进而促进肿瘤形成。NF-KB是具有多向转录调节作用的细胞核蛋白因子，不仅与细胞凋亡关系密切，而且与肿瘤形成有关。Bcl-2又是NF-KB的下游调节靶基因。因此，本研究采用免疫组化SP法分别检测Bcl-2和NF-KB在腮腺腺样囊性癌中的表达情况，探讨两者在腮腺腺样囊性癌发生发展中的生物学意义和相互关系，从而为该肿瘤的发生及发展提供有价值的标志物。 　　1 材料和方法 　　1.1 标本来源 　　1.1.1 实验组：选取1999～2012年山西医科大学第一医院和山西省晋中市第一人民医院手术切除的腮腺腺样囊性癌病理科存档蜡块49例，男性22例，女性27例。年龄21～85岁，平均年龄51.75岁。筛状型20例、管状型18例、实体型11例（WHO世界卫生组织 2007年涎腺肿瘤分类法）。I期4例、II期17例、III期21例、IV期7例（UICC国际抗癌联盟 2002年TNM分期）。病例纳入标准：①临床资料保留完整；②患者术前均未经任何抗癌治疗；③均行根治性手术；④全部经过回访，回访时间最长术后10年，最短术后7个月。 　　1.1.2 对照组：选取自山西省晋中市第一人民医院非腮腺肿瘤手术切除的20例正常腮腺组织标本。 　　1.2 主要试剂来源及实验方法：实验所用一抗均为即用型抗体，分别为兔抗人Bcl-2蛋白单克隆抗体（购自北京中杉）、鼠抗人Bax蛋白单克隆抗体（购自北京中杉）、兔抗人NF Kappa B/p50蛋白多克隆抗体（购自福州迈新）。免疫组化采用通用二步法（SP法），操作过程严格按照试剂盒说明书进行：石蜡切片脱蜡、水化，PBS冲洗三次，每次4～5min。每张切片滴加3%过氧化氢液，阻挡内源性过氧化物酶，室温下孵育10～15min，PBS冲洗三次，每次3～5min。切片加入抗原修复液中，微波炉加热，保持温度在92℃～98℃持续10～15min。取出容器，室温冷却20～30min，PBS冲洗。再滴加一抗，室温下孵育60min，PBS冲洗三次，每次3～5min。每张切片继续滴加二抗，室温下孵育30～60min，PBS冲洗三次，每次3～5min。每张切片滴加新鲜配置的DAB溶液，显微镜下观察3～10min，蒸馏水冲洗，苏木素染色，梯度酒精脱水，中性树胶封固。 　　1.3 结果判定：免疫组化染色标准参照抗体使用说明书：光镜下观察，免疫组化染色阳性细胞的胞浆为棕黄色或棕褐色，呈均匀染色或颗粒状。结果评估：以40×10倍显微镜计数5mm x10mm网格微尺内的阳性和阴性细胞数。随机计数5个高倍视野，求出平均每个高倍视野网格内阳性细胞百分率，阳性细胞数0.05） （见表2）。Bcl-2在TNM临床分期的I、II期阳性表达率85.71%明显高于111、IV期的53.57%，I、II期中、强阳性表达率76.19%也明显高于111、IV期的25.0%，研究结果显示Bcl-2总阳性表达率和表达强度随着肿瘤TNM分期的增加呈现下降趋势，Bcl-2在TNM临床分期的I、II期和111、IV期经统计学比较有显著性差异（P 　　2.2 NF-KB免疫组化结果：49例腮腺腺样囊性癌标本中34例NF-KB出现阳性染色，染色主要定位于癌细胞胞浆，少部分定位于细胞核，染色较均匀；20例正常腮腺组织中腺泡全部阴性染色，有7例导管系统出现弱阳性染色，阳性染色部位定位于管腔上皮细胞胞浆中，染色分布均匀，统计学分析两组差别有显著性差异（P0.05）（见表5）。NF-KB在TNM临床分期的I、II期阳性表达率明显高于111、IV期， I、I