第05节 常见色谱分离技术.pptx

第五章 常见色谱分离技术;5.1 绪论;2、色谱法的发展; 1956年Van Deemter等在前人研究的基础上发展了描述色谱过程的速率理论，1965年Giddings总结和发展了前人的色谱理论，为色谱的发展奠定了理论基础。;包括两相（即固定相、移动相）和样品。 固定相 在色谱过程中不发生移动。 材料：固体（相）、固体及其所支持的液体。 流动相 在色谱过程中不停地移动，并带动被分离物质一起移动。 材料：气体、液体。 样 品 溶质;色谱法的基本原理;下图为一二元组分分离示意图。;分 离 原 理;5.1.3 色谱法的分类（依据不同,分发不同）;开床式色谱;（3）按分离原理分类;（4）按使用领域不同对色谱的分类：;5.2 薄层色谱法;5.2.1 基本原理;基 本 原 理;溶质迁移的快慢用比移值Rf来表示;5.2.2 薄层色谱的固定相;② 酸碱性：;常见吸附剂吸附能力的比较：;⑤同分异构体若形成了分子内氢键，则对吸附剂的吸附力大大减小，如下列物质的吸附力大小为：;（3）吸附剂选用吸附色谱：?最常用的吸附剂有硅胶、氧化铝，粒度一般为150—300目筛孔，其次是聚酰胺和纤维素，其粒度一般分别为70—140目筛孔和160—200目筛孔。?氧化铝的极性比硅胶大，比较适用于分离极性较小的化合物（烃、醚、醛、酮、卤代烃等）；相反，硅胶适用于分离极性较大的化合物（羧酸、醇、胺等），而非极性化合物在硅胶板上吸附较弱，分离较差，Rf值较大。;表5-1 常见薄层色谱吸附剂（固定相）;2. 薄层色谱对吸附剂的要求;5.2.3 薄板的制备：;（2）制板方法：湿铺法 和干铺法 干铺法 概念：就是将吸附剂颗粒或粉末均匀地平铺在玻璃板上的方法，所制得薄板称为干板。 吸附剂粒度要求：一般为150－200目左右。 涂铺方法：把玻璃板平放在平台上或实验台面上，先将吸附剂大致平摊在玻板上，然后两手握住一根带有两个套圈的粗玻璃棒，按照图所示方向推动，把多余的吸附剂除去，便可得到一块均匀的薄板。玻棒套圈可以用塑料管或胶布等制成。两个套圈的厚度和距离，便是薄层的厚度和宽度。定性或定量板厚度：0.25－0.5mm；制备板厚度：1-3mm（此法也可用于制备大块湿板）。;;湿铺法 概念：将溶剂或含粘合剂的溶剂和吸附剂按一定的比例，[一般硅胶为30g/(75-90) ml，氧化铝为25g/50ml]，加到一起，调成糊状，然后再将糊状物均匀的铺在薄板上的方法。 吸附剂粒度要求：硅胶、氧化铝一般为200－300目左右；聚酰胺、纤维素一般为160－200目。 湿铺法的操作步骤： ①调糊 硅胶G、氧化铝G、硅胶GF254或不含粘合剂的吸附剂如硅胶H、氧化铝H的充分调匀，均是取1份吸附剂，加入2-3份水。 用CMC作粘合剂：0.5%羧甲基纤维素钠溶液100ml,加硅胶H（200－250目）30g或氧化铝50g，充分调匀后，即可涂铺。;用淀粉作粘合剂时：取硅胶H（200－250目）0.95份，加0.05份淀粉（可溶性淀粉不能用），加水2－3份，将容器放在沸水浴上加热，不停搅拌下煮沸5分钟，直到获得最大的粘稠度，再加水1份，再煮1－2min，调匀，冷后涂铺。 纤维素粉作粘合剂：纤维素粉1份，加水（或丙酮）5－6份调成糊状后涂铺。 聚酰胺1g，加6mL 85%甲酸，搅拌溶解后，再加70%乙醇3mL，调匀后，便可涂铺。 ;②徒手铺板：将调制好的薄层糊倒在备用的玻板上，用玻棒初步摊开，用拇指和食指抓住玻板一端，在桌面上反复震动数次，待薄层糊铺展均匀后，平放在平台上即可。此法简便、快速，最适合微型板的制备。 ③薄层板质量的判定：薄厚均匀，层面不应有波纹，也不应有透过吸附剂而看到玻璃板的斑点。 ④薄板的后处理：晾干后，活化。 硅胶板 一般在105℃,最高不超过128℃ ，烘箱中烘烤半小时，冷却后取出在干燥器中保存备用。作为分配色谱的硅胶薄层板无需活化，在室温下放置12h－24h后即可使用； 氧化铝板 200－220℃活化4h，得活性为Ⅱ级的板。150－160 ℃ 活化4h，得活性为Ⅲ－Ⅳ级的板。;2、薄板（吸附剂）活性测定： （1）海氏（Hermenek）法 适用对象：无粘合剂氧化铝和硅胶板 方法：取0.02mL染料混合液，分别滴于氧化铝（或硅胶）干板上（薄层：90×240×0.6mm），用四氯化碳展开（薄板与展开缸底夹角为10－20℃）。然后按下表中Rf值确定其活度级别。;;（2）斯托尔（Stahl）方法 适用对象：用湿铺板、经活化的含粘合剂的硅胶板 方 法：将三种染料的混合氯仿溶液点在薄层上，点的直径为1－2mm，用正己烷∶乙酸乙酯（9∶1）展开，30－60min内溶剂爬行10cm，如果三种染料的比移值（Rf）大小为对二甲氨基偶氮苯靛酚蓝苏丹红，则与Ⅱ级氧化