无菌操作和接种技术及微生物的分离、培养与数量测定 课件苏教选修1.pptx

学习导航 1.学会无菌操作和接种技术。(重点) 2．研究培养基对微生物的选择作用。(重点) 3．了解平板分离微生物的方法和计数。(重点) 4．简述从土壤中分离出分解纤维素的微生物的方法。(难点);;2.无菌操作——微生物接种技术的关键 (1)培养微生物用的试管、培养皿和微生物培养基等，在接种之前都需要_________。 (2)通常接种操作要在_______________的附近进行。;1．在微生物的培养过程中为什么要进行无菌操作？ 提示：无菌操作的目的是防止受到空气中的杂菌污染。;二、微生物的分离 1.原理：根据微生物对___________、氧气、pH等要求的不同，通过只提供目的微生物生长的_______条件，或加入某些抑制剂使非目的微生物不能生长，从而达到_____________微生物的目的。 2.方法 (1)据菌落形态特征初步分离;①菌落：________微生物在适宜的______培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，可以形成肉眼可见的、有一定__________的子细胞生长群体。当固体培养基表面众多菌落连成一片时，称为________。 ②菌落特征：不同微生物在________培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该类微生物进行______、_______的重要依据。;涂抹平板法;(1)使用已灭菌的接种环、培养基，操作过程中不再灭菌。(×) (2)富含有机物的土壤中微生物的种类和数量少，反之则多。(×) (3)菌落是肉眼鉴别微生物不同种类的重要依据。(√) (4)稀释涂抹平板法的结果都可在培养基表面形成单个的菌落。(×);三、土壤微生物的分离和计数 1.准备实验器材 2.采集土壤，制备悬液 (1)制备悬液 称取0.5 g土壤样品，倒入盛有50 mL无菌水的锥形瓶，振荡20 min，使土样充分打散，即成为10－2 g/mL的土壤悬液。;(2)等比稀释 用无菌移液管吸取0.5 mL土壤悬液注入盛有4.5 mL_________的1号试管，配成10－3 g/mL的土壤悬液。取另一支无菌移液管吹吸1号试管3次，使悬液均匀，再吸取0.5 mL注入盛有4.5 mL无菌水的2号试管，配成10－4 g/mL的土壤悬液。以此类推，依次配制成10－5 g/mL、10－6 g/mL、10－7 g/mL、10－8 g/mL的土壤悬液。;3.选择适于分离特定微生物的培养基 不同微生物的代谢特性不同，通过 ____________可选出所需要的特定微生物。 4.接种 采用3支无菌移液管分别吸取10－8 g/mL、10－7 g/mL、10－6 g/mL的土壤悬液各1 mL加入培养皿中，每个浓度设置_____个重复，并充分振荡混合均匀，用______平板法进行分离。;5.培养与观察 将培养皿倒置于________ ℃恒温箱中培养1～ 2 d，观察细菌菌落。 6.计数菌落 培养24～48 h后取出平板计数，选取菌落数为30～300的一组为代表进行统计。 每克土壤样品的细菌数＝某一稀释度几次重复培养后的菌落平均数×稀释倍数(假定涂抹所用稀释液为1 mL)。;2．A同学分离与培养土壤微生物时与其他同学的结果相差很大，请分析可能的原因是什 么？并进一步通过对照实验验证原因。;可能原因;四、设计实验分离土壤中能分解纤维素的微生物 1.研究目的 从土壤微生物中筛选出能分解纤维素的微生物。 2.实验原理 纤维素分解菌可以分泌____________，在用 __________作为惟一碳源的培养基中，纤维素分解菌能很好地生长，其他微生物则不能生长。;3.方法步骤 (1)制备选择培养基：培养基中提供碳源的物质只有____________。 (2)分装 (3)制备土壤稀释液：依次制备稀释度为10－1、10－2、10－3、10－4、10－5的土壤稀释液。;(4)接种培养：分别吸取各稀释度的土壤稀释液1 mL接种到滤纸条上，每个稀释度重复4次，置__________中培养。 (5)观察：检查各试管中滤纸条上出现的______和滤纸颜色的变化情况。;3．在等比稀释的过程中如何使微生物在菌液中均匀分布？你认为计数的菌落与实际菌落之间存在什么样的关系？ 提示：每次吸取前都要将土壤悬液充分振荡混合均匀。实际菌落数目大于计数的菌落数目。;;2.无菌技术的具体内容 (1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 (3)实验操作应在酒精灯火焰附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。 (4)实验操作时应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触。;特别提醒 在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。; 细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽灭菌锅、酒精、火焰