发酵工程 第五章 氧的供需与传递（李先磊）.pptVIP

第五节 发酵液中溶解氧的测定和控制 溶解氧连续检测的意义 发酵液中溶解氧的测定方法 控制发酵液中溶解氧的工艺手段 一、溶解氧连续检测的意义 发酵液中溶解氧的大小对菌体的代谢特性有直接影响，是发酵过程中控制的一个重要参数。 连续测定发酵液中的溶解氧浓度的变化，可随时掌握发酵过程的供氧、需氧情况，反映设备通气效果，以便有效控制发酵过程，为自动化控制创造条件 可以考察工艺是否满足发酵要求 随时发现异常情况（染菌、噬菌体、设备情况） 二、发酵液中溶解氧的测定方法 化学法 极谱法 压力法 1、化学法 在样品中加入硫酸锰和碱性碘化钾溶液，即有氢氧化锰生成，与样品中溶解氧反应生成锰酸。再在反应液中加入硫酸，使已化合的溶解氧与碘化钾反应，释放碘，滴定检测。 1、化学法 化学法测定时反应过程要与空气隔绝； 化学法测定的结果较准确，也是其他方法的基础； 化学法测定时样品不能含有氧化还原物质，同时也不能有颜色。 2、极谱法 极谱型(阴极)： O2+2H++2e →H2O2 原电池型(阴极)： O2+2H2O+4e → 4OH- 2、极谱法 极谱法测定原理：利用通过电流时发生的氧被还原成为双氧水，从而产生一个扩散电流，而扩散电流和溶解氧浓度成正比，测定扩散电流大小就可以测定发酵液中溶解氧浓度。 测定的结果一般是相对值。 2、极谱法 极谱型电极由于其阴极面积很小，电流输出也相应小，且需外加电压，故需配套仪表，通常还配有温度补偿，整套仪器价格较高，但其最大优点莫过于它的输出不受电极表面液流的影响。这点正是原电池型电极所不具备的。原电池型电极暴露在空气中时其电流输出约5～30μA(主要取决于阴极的表面积和测试温度)，可以不用配套仪表，经一电位器接到电位差记录议上便可直接使用。 3、压力法 恒温密闭容器中,有体积为VL的液体，通入气体压力为P1,体积为VG的气体至平衡时为P2。 即有(P1-P2)VG=nRT n=SVL, S= (P1-P2)VG/RTVL, S: 氧的溶解度（mol/m3); R: 气体常数，T: 绝对温度 三、控制发酵液中溶解氧的工艺手段 影响供氧效果的主要因素有：空气流量、搅拌转速、气体组分中氧分压、罐压、温度和培养基物理性质； 影响需氧（耗氧）的因素有：菌体的生理特性、培养基丰富程度、温度等； 控制溶解氧的工艺手段 控制溶解氧的工艺手段 改变通气速率 改变搅拌速率 改变气体组成中的氧分压 改变罐压 改变发酵液的理化性质 加入氧载体 氧控制的一般策略 1、改变通气速率 改变通气效率是通过变化KLa来改变供氧能力。 低通气量下，增大通气量对提高溶氧浓度有十分显著效果；空气流速十分大的情况下，不改变搅拌转速则会导致溶解氧浓度下降，产生副作用。 2、改变搅拌速率 通常改变搅拌速度的效果较好。 通气泡沫被充分破碎，增加有效气液接触面积； 液流滞流增加，气泡周围液膜厚度和菌丝表面液膜厚度减小，延长了气泡在液体中保留时间，提高供氧能力。 同时，在转速较低时，增加转速可以提高溶解氧浓度，而转速较高时，提高转速则同样会带来副作用。 3、改变气体组成中的氧分压 用通入纯氧的方法来改变空气中氧含量，提高了c*值，因而提高了供氧能力，但是纯氧的成本相对较高。 4、改变罐压 增加罐压实际上就是改变氧的分压来提高c*，从而提高供氧能力，但是此法有缺点。 提高罐压就要增加空压机出口压力，增加动力消耗； 发酵罐强度也要相应增加； 提高罐压后，产生的CO2溶解量也增加，导致pH值发生变化。 5、改变发酵液的理化性质 菌体的代谢会改变发酵液理化性质； 发酵液表面张力、黏度、离子强度等都会影响氧溶解度的大小； 可采用添加无菌水、消泡剂等影响发酵液性质的方法改善通气效果。 6、加入氧载体 用一定的氧载体提高气液相间氧的传递； 载体不溶于水，使溶液形成乳化状态； 常用的氧载体有：血红蛋白、烃类碳氢化合物、含氟碳化物。 发酵过程的控制一般策略： 前期有利于菌体生长，中后期有利用产物的合成 溶氧控制的一般策略： 前期大于临界溶氧浓度，中后期满足产物的形成。 7、氧控制的一般策略 菌体生长期： 酶系统 Ⅰ 酶系统 Ⅱ 关键因子 开始的细胞 生长好后的细胞 产物合成 7、氧控制的一般策略 产物形成期： 底物 产物 酶系统 Ⅱ 反应动力学问题 7、氧控制的一般策略 溶氧控制的实例 GA X DO 谷氨酸发酵： 要求：氧饱和度1 控制：0-12小时 小通风 12小时后 增加通风 原因：0-12小时菌体量较小，采用小通风 12 7、氧控制的一般策略 一般认为，发酵初期较大的通风和搅拌而产生过大的剪切力，对菌体的生长有时会产生不利的影响，所以有时发酵初期采用小通风，停搅拌，不但