第二章 酶的生物合成与发酵生产 第一节~第四节.pptVIP

二、产酶动力学 （一） 酶生物合成的模式 根据酶的合成与细胞生长之间的关系，可将酶的生物合成分为3种模式，即： 同步合成型 生长偶联型—— 中期合成型 部分生长偶联型——延续合成型 非生长偶联型 —— 滞后合成型 1. 生长偶联型（又称同步合成型） 酶的生物合成与细胞生长同步。 特点：酶的合成可以诱导，但不受分解代谢物阻遏和反应产物阻遏。 当去除诱导物、细胞进入平衡期后，酶的合成立即停止，表明这类酶所对应的mRNA很不稳定。 生长偶联型中的特殊形式——中期合成型 酶的合成在细胞生长一段时间后才开始，而在细胞生长进入平衡期以后，酶的合成也随着停止。 特点：酶的合成受产物的反馈阻遏或分解代谢物阻遏。 所对应的mRNA是不稳定的。 枯草杆菌碱性磷酸酶合成曲线 2.部分生长偶联型（又称延续合成型） 酶的合成在细胞的生长阶段开始，在细胞生长进入平衡期后，酶还可以延续合成较长一段时间。 特点：可受诱导，一般不受分解代谢物和产物阻遏。 所对应的mRNA相当稳定。 黑曲霉聚半乳糖醛酸酶合成曲线 3. 非生长偶联型（又称滞后合成型） 只有当细胞生长进入平衡期以后，酶才开始合成并大量积累。许多水解酶的生物合成都属于这一类型。 特点：受分解代谢物的阻遏作用。 所对应的mRNA稳定性高。 黑曲霉酸性蛋白酶合成曲线 总结：影响酶生物合成模式的主要因素 高：可在细胞停止生长后继 1）mRNA的稳定性 续合成酶 差：随着细胞停止生长而终 止酶的合成 2）培养基中阻遏物的存在 不受阻遏：随着细胞的生长而开始酶的合成。 受阻遏：细胞生长一段时间或平衡期后，酶才开始 合成。 酶生产中最理想的合成模式： 延续合成型：发酵过程中没有生长期和产酶期的明显差别。细胞开始生长就有酶的产生，直至细胞生长进入平衡期后，酶还可以继续生成一段时间。 对于： 同步合成型：提高对应的mRNA的稳定性，如降低发酵 温度 。 滞后合成型：尽量减少甚至解除分解代谢物阻遏，使 酶的合成提早开始。 中期合成型：要在提高mRNA稳定性以及解除阻遏两方 面努力。 (二) 产酶动力学 一般产酶动力学方程可表达为： 式中 X——细胞浓度(g /L) ?——细胞比生长速率(h-1) ?——生长偶联的比产酶系数(IU/g) ?——非生长偶联的比产酶速率(IU/(g?h)) E——酶浓度(IU/L) t——时间(h) 生长偶联型 部分生长偶联型 非生长偶联型 第三节 微生物发酵产酶 一、产酶微生物的分离和选育 1.优良产酶菌种应具备的条件 （1）酶产量高 （2）易培养（生长速率高、营养要求低） （3）遗传性能稳定，不易退化 （4）易分离提纯 （5）安全可靠（不是致病菌） 2.常用的产酶微生物 Escherichia coli Pseudomonas Bacillus subtilis Micrococcus Streptococcus Streptomyces Aspergillus niger Aspergillus oryzae Monascus Penicillium Trichoderma Rhizopus Mucor Absidia Saccharomyces cerevisiae Candida 3. 产酶微生物的分离和筛选 1)样品的采集:从富含该酶作用底物的场所采集样品 2)富集培养: 投其所好，取其所抗 3)分离获得微生物的纯培养（pure culture）。 4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。 5)复筛：选出产酶水平相对较高的菌株，以质为主。 ?-淀粉酶的筛选 蛋白酶产生菌的获得