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虾青素对HaCaT细胞氧化应激损伤保护作用 　　[摘要]目的：探讨虾青素对长波紫外线（UVA）辐射诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：采用人角质形成细胞HaCat细胞构建体外模型，MTT法测定细胞活力，酶生化法测定细胞超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）的活性和丙二醛（MDA）的含量。结果：虾青素能提高受UVA辐射的HaCaT细胞的增殖活力，提高胞质SOD和GSH-px的活性，降低细胞内MDA的含量。结论：虾青素对受UVA辐射的HaCaT细胞氧化应激损伤有一定的保护作用。 　　[关键词]虾青素；长波紫外线；HaCaT细胞 　　[中图分类号]Q813.1 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2013）11-1175-03 　　引起皮肤光老化的主要环境因素是阳光中的紫外线辐射（UVR），其中长波紫外线（UVA，波长 320～400nm）是引起皮肤老化的最主要因素，它能穿透皮肤角质层到达真皮层，引起真皮层胶原纤维减少和弹力纤维变性，出现特征性的光老化改变[1]。虾青素是一种含氧的类胡萝卜素，具有抗氧化功能，能有效清除氧自由基[2]。本实验主要探讨虾青素对人角质形成细胞（HaCaT细胞）受UVA辐射损伤后的保护作用及其可能的作用机制。 　　1 材料和方法 　　1.1 主要试剂：虾青素：纯度≥98%，美国SIGMA公司；胎牛血清：杭州四季青生物工程有限公司；胰蛋白酶：北京索莱宝科技有限公司；DMEM高糖培养基：美国GIBCO公司；四甲基偶氮唑蓝（MTT）粉：美国Sigma公司；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）、丙二醛（MDA）检测试剂盒和考马斯兰蛋白测定试剂盒：南京建成生物工程研究所。 　　1.2 细胞来源：HaCaT细胞购自武汉大学细胞典藏中心。 　　1.3 方法 　　1.3.1 细胞培养和分组：采用胎牛血清培养HaCaT细胞，传代时用胰蛋白酶进行消化。将细胞培养至指数生长期时，随机分为6组：空白对照组、UVA损伤组、UVA+0.1μg/L虾青素组、UVA+1μg/L虾青素组、UVA+10μg/L 虾青素组、UVA+100μg/L虾青素组。 　　1.3.2 MTT法测定HaCaT细胞增殖活性：将培养至指数生长期的HaCaT细胞接种于96孔培养板中，每孔200μl，密度为104个/ml。按上述方法进行分组，每组4个复孔，加入不同浓度虾青素。孵育12h后倒去培养基，使用PBS液冲洗3次???再次加入PBS液，采用强度为18J/cm2的UVA进行照射（除空白对照组外）。照射后倒去PBS液，继续用原培养基培养12h后，各孔加入MTT（浓度5mg/ml）20μl，孵育4h，吸去上清，加入200μl二甲基亚砜（DMSO），室温振荡15min。选择波长490nm在酶联免疫检测仪上测定各孔的吸光值。 　　1.3.3 SOD、GSH-px活性测定和MDA含量测定：仍按上述方法对细胞进行分组及UVA辐射处理，取经UVA辐射后继续培养12h的细胞，用胰蛋白酶消化，离心5min（1000r/min），吸去上清，冷无菌双蒸水调节细胞浓度，按照考马斯亮兰蛋白测定试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）测试盒、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）测试盒及丙二醛（MDA）测定试剂盒的说明书要求进行操作，分别于595nm、550nm、412nm、532nm处测定各组细胞的OD值，按公式计算出各组样本的蛋白含量、SOD活性、GSH-px活性以及MDA含量。 　　1.4 统计学分析：采用SPSS13.0软件，计量资料用（x±s）表示，对所得结果采用单因素方差分析。 　　2 结果 　　2.1 虾青素对HaCaT细胞活力的影响：与空白对照组比较，除UVA+100μg/L 虾青素组外，其余各组细胞的增殖活力（用OD值表示）明显下降，差异有统计学意义（P0.05），其余各组间比较差异均有统计学意义（P0.05），其余各组间比较差异均有统计学意义（P0.05），其余各组间比较差异均有统计学意义（P 　　虾青素作为一种类胡萝卜素，广泛存在于自然界的海洋动物体、藻体及部分陆生植物体内，其尤以抗氧化、防止心血管疾病、提高免疫力和抗癌作用突出[13]。虾青素能淬灭单线态氧，并有效清除氧自由基，类似维生素E，为脂溶性抗氧化剂，但其抗氧化活性高于VE，也高于β-C、玉米黄素、叶黄素和角黄素等类胡萝卜素[14]。然而虾青素在皮肤光老化中的作用研究较少，仅有个别研究指出某种含有虾青素成分的脂质体配方外用，对紫外线引起的皮肤损伤具有保护作用[15]。而关于虾青素对UVA辐射后角质形成细胞氧化应激损伤的保护作用及其可能相关机制尚未见报道。本实验在建立UVA辐射人角质形成细胞模型的基础上，探讨虾青素对体