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RNAi抗猪繁殖与呼吸综合征病毒研究进展 　　摘要：猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是世界上主要的猪传染性疾病之一，以妊娠母猪发热、厌食、早产、流产、死胎等繁殖障碍及仔猪高死亡率和育成猪呼吸困难，类流感症状、发育迟缓为主要的特征。该病给各个国家的养猪业带来巨大的经济损失，目前，疫苗和抗病毒药物只能提供有限的保护。自2006年以来，不断有研究者应用RNA干扰（RNA interference， RNAi）技术开展抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究，并取得了一些阶段性成果。对已有的研究成果进行了综述。 　　关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；RNAi；抗病毒 　　中图分类号：S852.6 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）05-0061-04 　　猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV） 属套式病毒目（Nidovirales） 动脉炎病毒科（Arteriviridae） 动脉炎病毒属（Arterivirus） 成员[1]，是一种有囊膜的单链正股 RNA 病毒。该病毒可持续性感染猪，引起免疫抑制，目前此病已经成为危害世界养猪业安全的重要病原之一[2]。近年来，PRRSV 病毒的变异导致高致病性PRRSV的出现，给中国养猪业带来致命的灾难。然而，目前使用的 PRRSV 疫苗只能部分阻止临床症状的出现，不能防治 PRRSV 感染，另外不同毒株间的交叉保护力也较低，因此人们对新型防控策略的研发充满了期待。 　　RNA干扰 （RNA interference，RNAi） 是由小干扰 RNA （small interfering RNA，siRNA） 或微 RNA （microRNA，miRNA） 所引起的以序列特异性方式介导的靶 mRNA 降解或翻译抑制的基因调控方式[3]，同时又是一种保守的抗病毒机制。近年 RNAi 技术已被用于干扰抑制多种人或畜类病毒的复制和感染研究。与传统疫苗预防和药物治疗相比，由于 RNAi 技术能够从源头上有效地抑制病毒抗原基因的表达，因此 RNAi 也许是一种更有效的抗病毒策略，尤其是在动物传染性疾病的防治方面，越来越多的证据也表明，RNAi 是生物体内一种古老而保守的抗病毒免疫形式。 　　对病毒而言，无论是 DNA 还是 RNA 病毒，只要其在细胞中经历 RNA 的阶段，都可能成为 RNAi 的靶标。RNAi主要抗病毒机制为：病毒在动物细胞内的复制会产生 dsRNA 复制中间体，作为激活 RNAi 的作用因子，这些中间体经加工后形成沉默复合体，特异性地与目的病毒 RNA 或 mRNA 结合，并将其降解[4]。众多的研究已表明特异性 siRNAs 介导的 RNAi 可以抑制病毒的复制、减少病毒 RNA 的数量和阻断病毒蛋白的表达，在病毒病的治疗上显示出一定效果[5，6]。但是病毒的进化和快速变异使其干扰 siRNA 和微 RNA（miRNA） 介导的沉默通路的能力也越来越强，在宿主细胞内病毒和宿主细胞 RNAi 的抑制作用展开了“博弈”，病毒只有能够逃逸宿主细胞 RNAi 这种基于核酸的免疫系统方能生存[7]。 　　病毒逃避 RNAi 的可能分子机制：一般来说，RNA 病毒主要通过靶区域的突变或编码病毒抑制子来逃避 RNAi 介导的抑制，或两者兼有，而 DNA 病毒则倾向于利用病毒抑制子逃避宿主 RNAi[8，9]。理解了病毒逃避 RNAi 的分子机制，我们才能更好的设计避免病毒产生抗性的高效 RNAi 片段。 　　1 microRNA（miRNA） 抑制PRRSV的相关研究进展 　　近年来，Xiao 等[10]对人工合成的microRNAs在MARC-145细胞中抑制高致病性PRRSV的复制进行了研究，该研究团队设计了分别靶向H-PRRSV主要结构蛋白GP5、M蛋白编码基因的5个amiRNAs，即基于小鼠miR-155设计的由PolII启动子驱动表达的pre-amiRNA表达载体上，使得这些amiRNAs能够像内源性的microRNA一样被加工成熟。结果5个amiRNAs对靶基因表达的抑制效率均在70%以上。amirGP5-370能在转录和翻译水平有效抑制靶基因的表达，并能抑制H-PRRSV在MARC-145细胞中的复制。当amirM-263与其自身串联一次后置于同一个表达框中时，串联表达的amirM-263能有效抑制H-PRRSV感染过程中靶基因的表达和病毒复制。双荧光素酶报告实验表明，串联表达amirGP5370和amirM-263能够同时抑制GP5与M蛋白编码基因表达。 　　Xia