第二章 工业微生物第4次课-2009.pptVIP

（五）分子育种 1.过量表达 （over expression) 目的： （1）直接生产酶 （2）强化代谢途径 方法： （1）游离载体，自主复制，拷贝数高，不稳定（2）整合型载体，整合到染色体 ，稳定，整合如何做到高拷贝？重复顺序，核糖体RNA(rDNA)基因、转座子。 2. 基因敲除（knock out）（基因缺失，破坏） （1）基因功能分析 （2）菌种选育 3. 基因定点突变（site-directed mutation) （1）替换 （2）插入 （3）缺失 4. Knock in; knock out and knock in 6.基因组重排（genome shuffling） 多亲株多轮原生质体融合 筛选的有效性 第三节 工业生产菌种的复壮与保藏 一、退化现象及原因 二、复壮 三、菌种的保藏 一、工业生产菌种的退化现象及原因 什么是菌种退化? 表现： 产量性状及与产量性状相关的形态上和生理上的变化 抗不良条件能力的下降，如抗噬菌体，耐温性能等 量变到质变的逐渐演化过程 （一）菌种退化的原因 基因突变（回复突变） 分离现象 （二）菌种退化的防治 1.菌种选育方面： 使用孢子或单核菌株，避免对多核菌株进行处理 较高的诱变剂量，减少回复突变 充分的中间培养及分离纯化 2.控制传代次数 3.创造良好的培养条件 4.利用不易衰退的细胞传代，孢子 5.有效的菌种保藏方法 二、生产菌种的复壮 纯种分离 淘汰已衰退的个体 选择合适的培养条件 三、工业生产菌种的保藏 保藏的意义： 存活健在 避免退化，保证高产稳产 保证研究结果良好的重现性 基本措施 降低营养成分，低温，干燥，缺氧等条件，使其处于生长停滞或休眠状态 常用保藏方法 斜面保藏和穿刺保藏（好气性） 沙土管干燥保藏 产孢子的丝状真菌或放线菌，或产芽孢的细菌 真空冷冻干燥保藏方法 安瓿管的处理 保护剂的使用，目前国内常用脱脂乳和蔗糖，国外尚有运用动物血清等的。 低温保藏 普通冷冻保藏技术(-20℃) 超低温冷冻保藏技术(-60一-80℃) 液氮冷冻保藏技术 保护剂的的使用，甘油，二甲基亚砜 不同保藏方法的比较 菌种保藏的注意事项 菌种在保藏前所处的状态 菌种保藏所用的基质 操作过程对细胞结构的损害 国内外菌种保藏机构 国外： ATCC（American Type Culture Collection） ATCC is a global bioresource center that stores and distributes biological materials such as cell lines, bacteria, animal and plant viruses and antisera, fungi, protozoa, algae, clones and other molecular genomic materials ATCC(American Type Culture Collection）美国典型菌种保藏中心ATCC 主要从事农业、遗传学、应用微生物、免疫学、细胞生物学、工业微生物学、菌种保藏方法、医学微生物学、分子生物学、植物病理学、普通微生物学、分类学、食品科学等的研究。该中心保藏有藻类111株，细菌和抗生素16865株，细胞和杂合细胞4300株，丝状真菌和酵母46000株，植物组织79株，种子600株，原生动物1800株，动物病毒、衣原体和病原体2189株，植物病毒1563种。另外，该中心还提供菌种的分离、鉴定及保藏服务。该中心保藏的菌种可出售。 ARS Culture Collection - NRRL / Welcome to the new ARS (NRRL) Culture Collection website. The Collection is housed within the Microbial Genomics and Bioprocessing Research Unit at the National Center for Agricultural Utilization Research (NCAUR) in Peoria, Illinois. This website contains information specific to the ARS Culture Collection, but additional information regarding the Research Unit and NCAUR --- Northern Regional Research Laboratory Agricultu