生物化学第五讲3.pptVIP

第三部分 蛋白质空间结构与理化性质 蛋白质的三维结构 蛋白质分子的多肽链按一定方式折叠、盘绕或组装成特有的空间结构，亦称高级结构。蛋白质的高级结构即蛋白质的构象。 一、蛋白质的二级结构 （一）二级结构的概念 蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象 。 二、蛋白质的超二级结构 （一）超二级结构的概念 指蛋白质中相邻的二级结构单位(即单个?-螺旋或?-转角)组合在一起，形成有规则的在空间上能辩认的二级结构组合体。 ★超二级结构在结构层次上高于二级结构，但没有聚集成具有功能的结构域。 超二级结构类型 蛋白质的空间结构 蛋白质结构与功能的关系 二、蛋白质三维结构与功能的关系 （二）血红蛋白的构象变化与结合氧 Hb与Mb一样能可逆地与O2结合， Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。 协同效应(cooperativity) 一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应。 如果是促进作用则称为正协同效应 (positive cooperativity) 如果是抑制作用则称为负协同效应 (negative cooperativity) 变构效应(allosteric effect) 蛋白质空间结构的改变伴随其功能的变化，称为变构效应。 蛋白质的理化性质与分离纯化 一、蛋白质的理化性质 （一）蛋白质的两性电离 蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。 * 蛋白质的等电点( isoelectric point, pI) 当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。在等电点时蛋白质的溶解度最小，在电场中不移动。 蛋白质的颜色反应 p129 3.变性的因素 加热、有机溶剂、强酸、强碱、表面活性剂 （如十二烷基硫酸钠即SDS）、还原性试剂 （尿素、盐酸胍）、紫外线、机械力等 。 4.变性蛋白质性质的改变 ① 生物学功能的丧失（主要标志）； ② 分子形状改变，肽链松散，反应基团增加，易被 酶消化； ③ 疏水基团外露，水化层被破坏，溶解度降低，易 形成沉淀析出，粘性增加，紫外吸收改变等； ④ 丧失结晶能力。 5.蛋白质的复性 若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，可缓慢地重新自发折叠成原来的构象，恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation) ，这种变性也称为可逆变性。 蛋白质的分离纯化 蛋白质分离纯化的一般原则 提纯的目标：尽量提高蛋白质的纯度或比活性，设法除去变性的和不需要的蛋白质，尽可能提高蛋白质的产量。 根据蛋白质的性质加以选择，如分子大小，溶 解度、电荷、吸附性质及生物亲和力等。 3. 凝胶过滤 a.又称分子筛层析，是根据分子大小分离蛋白质 混合物最有效的方法之一。 b.常用葡聚糖凝胶（商品名为Sephadex)和琼脂糖凝 胶（商品名为Sepharose）。 c.网孔大小—用交联剂与葡聚糖或琼脂糖的比 例来实现 d.大分子先洗脱下来，小分子后洗下来。 纯化中应用最多的是聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电聚焦电泳，它们既可以作为蛋白质纯度检验方法，也可以纯化、制备蛋白质。 2.离子交换层析法 1）根据蛋白质带电荷情况 2）不同载体： 离子交换纤维素 离子交换交联葡聚糖：兼有分子筛效应 离子交换交联琼脂糖 蛋白质含量分析和纯度鉴定 （一）? 含量的测定 1. 凯氏定氮法： 2. 双缩脲法 3.紫外线吸收法 等电聚焦电泳：当蛋白质在其等电点时，净电荷为零，在电场中不再移动。 + + － － － － + － － － － － 5.0 6.0 7.0 稳定pH梯度 5.0 6.0 7.0 稳定pH梯度 通电 + + － － － － + － － － － － + + － － － － + － － － － － + + － － － － + － － － － － O2 血红素与氧结合后，铁原子半径变小