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分子佐剂CpG DNA研究进展及应用概况 　　摘要 免疫佐剂的主要作用是提高抗原（免疫原）的免疫原性和免疫反应的可持续性，它能诱导机体的免疫系统对抗原产生体液免疫或细胞免疫反应。近年来，免疫佐剂的研究越来越受到人们的关注，该文着重介绍分子佐剂CpG　DNA的研究进展及应用概况，以为开发研制高效、低毒、结构新颖的免疫佐剂提供参考。 　　关键词 分子佐剂；CpG　DNA；研究进展；应用 　　中图分类号 R392.11 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2012）24-0269-01 　　作为一种非特异性免疫增强剂，当佐剂与抗原一起注射或预先注入机体时，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。同时，既减少了抗原的使用量，增加了机体抗体的产生量，又可以减轻免疫耐受。 　　近年来，佐剂发展较快，多种新型佐剂不断涌现，黏膜佐剂、纳米佐剂、天然佐剂及分子佐剂等是目前研究的热点。用分子佐剂来提高基因疫苗的免疫效率是基因疫苗研究的关键，很多分子佐剂如CpG　DNA、细胞因子、共刺激分子、趋化因子、C3d、免疫刺激调节分子等成为当前研究的热点。 　　1 CpG　DNA的研究进展 　　CpG　DNA是一种DNA序列，其核心是一些未甲基化的CpG基序，具有免疫激活功能，它包括ODN（oligodeoxynucl-eotides，含CpG基序）和细菌、病毒、无脊椎动物等低等生物的基因组DNA，其碱基普遍遵循5-嘌呤-嘌呤-嘧啶-嘧啶-3的排列规律[1]。研究表明，这种排列可激活多种免疫效应细胞，又称为免疫刺激DNA序列，其在细菌和病毒基因组中出现的频率至少是脊椎动物基因组的20倍，使入侵的外来细菌和病毒能够轻易地被脊椎动物的免疫系统所识别，从而激活相应的免疫应答机制。 　　CpG　DNA的免疫激活机制可通过模式识别理论来解释，该理论是2000年由美国免疫学家Janeway　et　al提出的，病原相关分子模式（PAMP）是指天然免疫针对主要靶分子信号，模式识别受体（PRR）是指相对应的识别受体。天然免疫中TLR家族成员识别PAMP后，从而在抗感染天然免疫中发挥重要作用。根据这一理论，CpG基序就是一种在进化中高度保守的PAMP，它可以被宿主天然免疫细胞上的PRR识别（主要是Toll样受体9，TLR-9）。TLR9受体能特异性识别CpG　DNA[2]，两者之间的特异性非常强，1个碱基的改变就能导致刺激活性的消失，均将使其免疫刺激作用丧失或降低，因此不能被TLR9受体有效识别。 　　CpG　DNA几乎对所有蛋白质抗原和灭活疫苗都具有佐剂活性，具有以下作用：①活化NK细胞和巨噬细胞，能使其细胞毒活性明显增强；②通过诱导Th1型细胞免疫因子IFN-γ、IL-12和IL-18的分泌，增强抗原特异性的Th1型免疫反应；③诱导IFN-α/β和IFN-γ等多种细胞因子的分泌，促进机体抗病毒反应；④调节免疫反应，提高抗体水平。 　　田兴山等研究发现，无论何种浓度的CpG　DNA，均能使仔鸡的淋巴细胞IL-2诱生活性、特异性抗体水平和淋巴细胞增殖反应显著提高，由此表明鸡对常规疫苗的免疫应答能力可以通过CpG　DNA而明显增强。Lopez　et　al[3]以马为试验对象，证明CpG　ODN　2007对马流感病毒疫苗有增强作用。另外，Moldoveanu　et　al[4]研究发现　CpG　佐剂能够增强黏膜免疫的效果；Shi　et　al[5]报道，CpG　ODN可用于鼻喷免疫的疫苗佐剂。 　　当前，对抗原—载体—CpG　DNA佐剂整体系统的药剂学研究是CpG　DNA　研究的热点领域，包括CpG基序和类型的选择及载体系统的研究等，为制备低毒、高效、长效的新型免疫佐剂开辟新途径，这将使CpG佐剂的应用具有更多选择性和可控性。另外，一些研究表明，如果能使CpG　DNA与抗原在物理空间上更加接近，则CpG　DNA的佐剂活性可以提升10倍乃至上百倍。因此，研究人员开展了大量提升佐剂活性方法的研究，包括使用矿物油混合，或者微粒、纳米粒包裹或吸附，或者蛋白质等大分子与CpG　DNA直接以化学键连接等方法。 　　2 CpG　DNA的应用概况 　　2.1 CpG　DNA在肿瘤治疗中的应用 　　Carpentier　et　al[6]研究发现，通过活化巨噬细胞，CpG　ODN能够有效地对抗肿瘤的恶性进展，其中CpG　ODN　1826对肿瘤的对抗效果在治疗多种肿瘤模型的试验中已经得到证实[7]，如小鼠的直肠癌、黑色素瘤等均能降低成瘤率，并延长荷瘤小鼠的生存时间。目前，发现Thl/Th2型免疫反应向Th2型反应偏倚的病例。CpG-ODN具有诱导Th1型反应的作用，有利于机体抗肿瘤反应。 　　2.2 CpG　DNA在提高机体免疫力中的应用 　　田兴山等[8