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第五章 微生物的生长繁殖与 生存因子 ; 一、微生物生长繁殖的概念; 一、研究微生物生长的方法 微生物生长分个体生长和群体生长。培养方法有分批培养和连续培养。 ;停滞期;1、停滞期（迟滞期或适应期）（lag phase）: 将细菌接种到某一培养基后，细菌并不立即繁殖而是经过一段适应期才能生长繁殖。调整适应表现在合成多种酶、完善体内的酶系统及其他细胞成分。 ; 影响因素： （1）接种量。接种量大，停滞期可缩短 （2）菌龄。菌种年轻，对数生长期接种，停滞期可能很短甚至不明显; 2、对数期（指数期）log phase 细菌生长速度达到最大，数量以几何级数增加。 ;世代时间的计算： ;影响因素： （1）温度。在适温范围内，每增加10℃，生长速度提高1倍；;（2）营养； （3）氧气。好氧菌若能供给充足的氧，可能使对数期延长。; 3、静止期 stationary phase 由于营养消耗，供应不足及代谢产物的积累，这时一部分菌死亡，细菌进入静止期。;特点： （1）菌数达到最高峰； （2）活菌数达到动态平衡； （3）生长速率为零； （4）开始积累贮存物质 ; 4、衰亡期 decline phase 由于营养缺乏和代谢产物积累造成自身中毒，细胞生长受阻，时间和菌数对数呈反比，生长曲线直线下降。 特点： （1）生长速率为负值，活菌数减少； （2）细菌发生自溶现象autolysis （3）代谢产物大量积累； （4）形态多变，出现畸形或衰退形。 ;（一）连续培养 原理：如果在培养器中不断补充新鲜营养物质并及时不断地以同样速度排出培养物，理论上讲，对数生长期可以无限延长。 ; 恒浊连续培养可以不断提供具有一定生理状态的细胞，可以得到以最高生长速率进行生长的培养物，在微生物工业上运用此法可得到大量菌体及相应的代谢产物如乳酸、乙醇。 ;2、恒化连续培养 维持进水中的营养成分恒定，从而保持细菌的恒定生长速率称恒化连续培养，也称恒组成连续培养。 恒化连续培养基中，某种必须的营养物质必须在低浓度作为限制性因子，其他成分过量。这样，细菌的生长速率取决于限制性因子的浓度。 常用的限制性营养物质有作为N源的氨、氨基酸；作为C源的葡萄糖、麦芽糖、乳酸；生长因子、无机盐等。 ;;; 稀释度（率）：新鲜培养基流入的速度为f，培养器中培养液体积为V，稀释度为D=f/V，表示单位时间内，新加入的培养基体积与培养器内培养基总体积之比。 随着D增大，细菌浓度先升后降，但在相当大范围内这种变化不明显。当稀释度增大到最大比生长速率时，微生物的增长速率赶不上流出速率，结果必然是到某一时刻，微生物浓度降到维持生长所必需的最低浓度（临界浓度）之下，这时培养器内微生物浓度趋于零。这时的D为临界稀释度。 ;三、细菌生长曲线在废水处理中的应用 在废水生物处理时，可利用不同生长阶段的微生物处理废水： ;四、微生物生长量的测定方法 可根据菌体细胞量、菌体体积、重量直接测定，也可以根据某种细胞物质的含量或某个代谢活动速度间接测定。 ;1、测微生物总数 （1）计数器直接计数;（2）染色涂片计数 将已知体积的待测材料均匀涂布在载玻片的已知面积内，染色后显微镜下计数。一般1cm2 均匀涂片0.01ml样品。选择几个至十几个视野计数细胞数量。借助镜台测微尺测直径可计算出视野的直径： 每ml总数=视野平均菌数×1 cm2/视野面积×100×稀释倍数;（3）比例计数法 将菌液与等体积血液混合后涂片，计算细菌数与红细胞比例。根据比例来计数;2、 测定活菌数;（3）液体稀释培养基计数：将待测样品作连续10倍稀释，一直稀释到稀释液的少量接种到新鲜培养基中没有或极少生长。记录每个稀释度出现生长的试管数，再用或然率理论，查MPN（most probable number，最大可能数量）表，根据样品的稀释倍数就可计算出其中的活菌含量。;3、 计算生长量：测细菌重量;第二节??? 微生物的生存因子;一、温度 温度对生活机体的影响表现在两方面：一方面是随着温度上升，细胞中生物反应和生长速率加快，另一方面蛋白质、核酸等可能在高温下被破坏。每种微生物都有最低生长温度、最高生长温度、最适生长温度、致死温度。; 微生物类型 生 长 温 度 ／ ℃ 最低 最适 最高;