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不同刺激因素对小鼠胶原影响 　　【摘 要】目的：探讨辐射刺激、心理应激加酒精刺激及抗原免疫刺激3种不同因素对胶原蛋白的代谢失调及组织器官的损坏。方法：辐射刺激采用γ射线照射，心理应激加酒精刺激采用小站台水环境应激加质量浓度42%白酒灌胃刺激，抗原免疫刺激采用II型胶原免疫。胶原蛋白采用苦味酸-天狼星红染色，偏振光显微镜下观察；Image-Pro Plus图像分析系统胶原变化状况。结果：辐射损伤后胶原在血管周围的面积明显较非刺激组增多，辐射后4周较2周更严重；心理应激加质量浓度42%白酒灌胃后，心、肝、肾的血管周围均出现胶原沉聚面积加大，且向周围组织渗透；II型胶原免疫后关节腔胶原的沉聚面积较非刺激组更为严重，导致关节强直。结论：物理、化学、心理及生物因素都会不同程度影响胶原蛋白的代谢与失衡，这些胶原蛋白沉聚在血管周围导致硬化，反应的面积大小次序为心肾肺肝。沉聚在关节周围导致关节强直或活动受限。 　　【关键词】 胶原蛋白；辐射损伤；心理应激；酒精肝损伤；小鼠；实验研究 　　胶原蛋白是生物体内一种重要的蛋白质，也是结缔组织的主要蛋白成分，由于其优良的理化性质和生理活性功能，已引起人们的广泛关注。水解动物蛋白又称酶解胶原蛋白，是一种生物性高分子物质，其含有的18种氨基酸中有7种是人体必需的，还含有人体所必需的部分金属微量元素，蛋白营养价值高、性能优越，是良好的天然生理活性物质，易被人体吸收利用，故能促进细胞生长，改善人体多种功能，免疫调节作用明显。骨胶原多肽具有抗高血压、抗氧化和衰老、预防和治疗骨关节炎和骨质疏松、治疗胃溃疡等疾病和促进皮肤胶原代谢、促进矿物质吸收等生理功能[1-3]。 　　但是事物都有其两面性，在自然界和日常生活中，可怕的物理、化学、心理和生物的致病因素会给胶原带来不同的“新生”，胶原的作用可谓喜忧参半。辐射损伤、心理应激及酒精肝损伤及免疫性关节炎实验提示，胶原参与了疾病的发生发展过程，现将研究结果报道如下。 　　1 实验材料 　　1.1 实验动物 7～8周龄昆明小鼠（购于北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号0205315）70只，雌性，体质量20～22 g。 　　1.2 实验试剂 天青石蓝、饱和苦味酸天狼星红（Sigma公司生产）、质量浓度42%白酒。 　　1.3 实验仪器 60Coγ照射机（北京双原仪器有限公司生产）；有机塑料盒；电刺激条件反射箱及水站台实验设备（自制）；均质仪（Ika）、日本生产的OLYMPUS IX-70倒置荧光显微镜及Image-Pro Plus图像分析系统。 　　2 方 法 　　2.1 动物分组 ①按物理因素刺激分为未照射组、照射组；②按心理及酒精因素刺激分为未应激组、心理应激组、心理应激+酒精刺激组。③按生物因素刺激分为未刺激组、胶原免疫刺激组。按以上3种因素将实验用小鼠共分为7组，每组10只。正常饲养。 　　2.2 物理因素刺激（放射照射刺激） 照射动物采用60Coγ射线进行全肺单次照射24Gy。2周和4周取肺病理切片。 　　2.3 心理及酒精因素刺激（应激+酒精刺激） 电刺激条件反射箱，实验时通电，放入小鼠，电击其足底部；每日定时电击1次，每次20 min。电击后，水环境站台18 h，即7：00-23：00，中间每隔3 h给予食物灌胃1次，每天22：00给予酒精诱导，持续10 d。取心、肝、肾病理切片。 　　2.4 生物因素刺激（II型胶原免疫刺激） 取0.05 mL 　　乙酸加入Ⅱ型胶原冻干粉中，使其混合均匀，将完全佐剂置入试管中，开启均质仪慢慢加入等量Ⅱ型胶原，乳化至油包水状。在每只小鼠尾根注射Ⅱ型胶原和完全佐剂乳化后的混合液0.1 mL，1周后以相同剂量予每只大鼠尾部加强注射1次，取关节病理切片。 　　2.5 苦味酸-天狼星红染色 组织病理切片用质量浓度0.1%饱和苦味酸天狼星红溶液染色60 min， 　　自来水洗5 min。May-苏木素染液复染细胞核1 min， 　　自来水洗10 min，梯度酒精脱水各1 min，二甲苯透明各15 min，中性树胶封片。偏振光显微镜下观察肺泡间隔及肺间质面内胶原的沉聚分布。 　　用日本产OLYMPUS IX-70倒置荧光显微镜及Image-Pro Plus图像分析系统，在偏光显微镜下分别测定胶原在血管周围的面积变化。 　　2.6 统计学方法 采用SPSS15.0软件进行统计分析，计量资料以表示，组间差异采用方差分析及t检验，以P 　　4.1 胶原蛋白与血管 器官纤维化是导致器官衰竭的常见原因之一，在发达国家，大约有45%的患者死亡与慢性纤维增生性疾病有关。在我国，肺纤维化的发病率近年有上升趋势。肺纤维化与肺泡毛细血管基底膜受损、上皮内皮细胞再生障碍及肺组织的异常修复有关，它以过度的细胞