细胞与分子生物学技术人类染色G显带标本的制备.pptVIP

染色体G显带标本的制备  原理 常规制备的染色体标本经烤片后，用热碱、各种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等预处理再以Giemsa 染色，在油镜下可看到染色体两臂显示出着色深浅不同的横纹。最常用的是胰蛋白酶法。 染色体带型的形成主要取决于DNA、核酸结合蛋白及染料三者的相互作用，主要是指DNA的碱基组成以其与结合蛋白形成的特定结构对染料分子的作用。 可能的机理是：G带区含有较丰富的A-T 对，在间期核呈固缩状态，而且是DNA晚复制区之一，其与蛋白结合紧密而不易被胰酶分解，因而深染；而G阴性带区富含G-C对，蛋白与其结合较疏松，易被胰酶消化分解而不易着色。（。。。深染区由许多二硫键交联，浅染区则缺乏二硫键、多硫氢键。。。） Giemsa染料是天青-伊红染料，着色首先取决于二个天青分子同蛋白结合，在此基础上再结合一个伊红分子，通过胰酶的显带预处理可除去阴性G带区的蛋白。 试剂及器材 试剂：胰蛋白酶、0.4%酚红、5% NaHCO3、Giemsa原液、pH7.4磷酸盐缓冲液，0.85%生理盐水。 器材： 37℃恒温水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴头。 实验步骤 取胰酶25mg，溶解于盛有50 ml0.85%生理盐水的染色缸中，置37℃恒温水浴箱中，加入0.4%酚红2滴，混匀，以5% NaHCO3调节pH为6.6-7.0。 实验步骤 待胰酶液温度升至37℃后，将染色体标本片（37℃烘箱烤片）放入胰酶液中，并轻轻摆动，数秒（视烤片时间而定）后取出，立即自来水冲洗。 实验步骤 染色：pH7.4磷酸盐缓冲液 4.5 ml Giemsa原液 0.5 ml 染色8-10分钟。 自来水冲洗，空气干燥，镜检。 注意事项 良好的培养效果为，标本片上中期分裂相要多，且染色体分散要好。 染色体长度应能适应显带分析技术的要求。 G显带成败之关键取决于胰酶液的浓度和处理时间之搭配。 显带不够标本的补救（无水乙醇脱色1-2min；甲醇冰醋酸固定液脱色1h后烤片、消化、染色）标本 实验结果 低倍镜下可看到中期分裂相，进而转至高倍镜及油镜下观察，可见染色体较为饱满，分布均匀，着色较好，沿染色体长轴可显出深浅不同的G带横纹。 人类染色体G带歌谣： 一秃二蛇三蝶飘，四像鞭炮五黑腰；六号像个小白脸，七盖八下九苗条，十号长臂近带好，十一低来十二高；十三、四、五一二一；十六长臂缢痕大，十七长臂带脚镣，十八白头肚子饱；十九中间一点腰，二十头重脚飘飘；二十一好象黑葫芦瓢，二十二头上一点黑；X染色一担挑，Y染色长臂带黑脚。