上调和激活肺动脉平滑肌细胞上的钙敏感受体参与肺动脉高压发病机制的研究-内科学(呼吸)专业论文.docx

0.01）。而用U73343 (U73122 的无活性同类体) 1μM加入 2.2mmol/L的有钙液体灌流 PASMC(n=45)后[Ca2+]cyt的上升幅度未受到抑制，峰值由 880+70nM变化到 830+75nM， 差异无统计学意义（P0.05）。进而以同样方法，IPAH-PASMC(n=46)中[Ca2+]cyt 在 2.2mmol/L的有钙液体灌流后明显升高,峰值达 918+89nM，地尔硫卓 10μM 加入2.2mmol/L的有钙液体灌流PASMC后[Ca2+]cyt的上升幅度无变化，峰值为 923+82nM， 差异无统计学意义（P0.05）。最后, 用相同方法发现，IPAH-PASMC (n=22)中[Ca2+]cyt 在 2.2mmol/L的有钙液体灌流后明显升高,峰值达 1350+316nM，而KB-R7943（Na+/Ca2+ 交换的抑制剂）10μM加入 2.2mmol/L的有钙液体灌流PASMC后[Ca2+]cyt的上升幅度无 变化，峰值为 1253+213nM，差异无统计学意义（P0.05）。结论：特发性肺动脉高压患者 PASMC 上钙敏感受体被激活，进而通过经典的PLC-IP3 途径调节细胞内钙信号，引起肺动脉高压。第三部分钙敏感受体在肺动脉高压大鼠和小鼠的肺动脉平滑肌细胞中 功能激活伴表达增加目的：探讨 CaSR 在野百合碱（MCT）致肺动脉高压（MCT-PH）大鼠模型和慢性缺氧致肺动脉高压（HPH）小鼠 PASMC 中的表达，并观察从肺动脉高压动物原代 分离的 PASMC 中 CaSR 的功能变化。方法：采用Western Blot、PCR和免疫荧光染色等方法检测，比较①MCT-PH大鼠 和正常大鼠②HPH小鼠和正常小鼠中肺动脉组织或分离出PASMC中CaSR的表达，并 且用PASMC胞浆内钙离子浓度测定的方法，比较从①MCT-PH大鼠和正常大鼠②HPH 小鼠和正常小鼠中肺动脉分离出的原代培养的PASMC中CaSR的功能，通过梯度提高 细胞外高浓度钙离子激活CaSR，检测胞浆内钙离子浓度([Ca2+]cyt)变化的程度来评价 CaSR功能的变化。结果：用大鼠分离的肺动脉行PCR检测，结果发现MCT大鼠组(n=6)（4.51+0.21 倍于GAPDH）明显高于对照组(n=6)（0.95+0.11 倍于GAPDH）（P值＜0.05）。用大鼠 分离的肺组 织行 Western Blot 检 测，结果 发 现 MCT 大鼠组 (n=6)（ 1.12+0.11 倍于 β-tubilin）明显高于对照组(n=6)（0.49+0.15 倍于β-tubilin）（P值＜0.05）；用免疫荧光 染色方法检测大鼠肺动脉CaSR表达，发现MCT大鼠组(n=6)明显高于对照组(n=6)。用小鼠分离的肺组织行Western Blot检测，结果发现HPH小鼠组(n=6)（1.19+0.09 倍于 β-tubilin）明显高于对照组(n=6)（0.31+0.04 倍于β-tubilin）（P值＜0.05）。用小鼠分离 的肺动脉行Realtime PCR检测，结果发现ΔΔCt在HPH小鼠组(n=6)（1.21+0.10）明显高 于对照组(n=6)（0.31+0.04）（P值＜0.05）。在大鼠PASMC实验中，先后用无钙液体和 2.2mmol/L的有钙液体灌流PASMC观察[Ca2+]cyt 的变化，正常组PASMC(n=45)灌流后 [Ca2+]cyt上升的峰值为 51+16nM，而MCT大鼠组PASMC(n=46)中[Ca2+]cyt在 2.2mmol/L 的有钙液体灌流后明显升高，峰值为 550+71 nM，用CaSR抑制剂NPS2143 干预细胞 后，MCT组的[Ca2+]cyt在 2.2mmol/L的有钙液体灌流后的升高幅度明显被抑制，峰值 下降到 91+22 nM，较抑制前比较，差异有统计学意义，P值均＜0.05；而正常组无明 显变化，峰值为 59+21nM，较抑制前比较，差异有统计学意义，P值0.05）。进而， 在小鼠PASMC实验中，先后用无钙液体和 2.2mmol/L的有钙液体灌流PASMC观察 [Ca2+]cyt的变化，正常组PASMC(n=44)灌流后[Ca2+]cyt上升的峰值为 182+19nM，而HPH 小鼠组PASMC(n=46)中[Ca2+]cyt 在 2.2mmol/L的有钙液体灌流后明显升高，峰值为 570+19 nM，用CaSR抑制剂NPS2143 干预细胞后，HPH小鼠组的[Ca2+]cyt在 2.2mmol/L 的有钙液体灌流后的升高幅度明显被抑制，峰值下降到 206+21nM，较抑制前比较， 差异有统计学意义，P值＜0.05；而正常组无明显变化，峰值为 179+11 nM，较抑