胞内捕获cxcr4抑制头部鳞癌淋巴转移的实验分析-experimental analysis on inhibition of lymphatic metastasis in head squamous cell carcinoma by intracellular cxc r4 capture.docx

天津医科人学硕十学位论文中文摘要目的探讨融合基因CXCLl2．KDEL转染入人口腔鳞癌细胞系Tb3．1后对裸鼠种植性肿瘤生长增殖及淋巴结转移的抑制作用。评价融合基因CXCLl2．KDEL对CXCR4的胞内捕获作用，寻找抑制口腔鳞状细胞癌增殖和转移的有效靶点，对口腔鳞癌靶向治疗进行初步探讨。方法电转染CXCLl2一KDEL．plRES2．EGFP及空质粒plRES2．EGFP真核表达载体至人口腔鳞癌细胞系Tb3．1，G418抗性筛选及单细胞克隆扩增培养，获得稳定表达的阳性克隆转染细胞系CXCLl2．KDEL．plRES2．EGFP．Tb3．1及plRES2．EGFP．Tb3．1．建立荷瘤裸鼠模型，分CXCLl2．KDEL．PIRES2．EGFP组(实验组)，PIRES2．EGFP空白质粒对照组(空载体组)及未转染组(未转染组)。’以5×105个细胞局部接种于裸鼠颊粘膜。观察肿瘤生长情况，绘制肿瘤生长曲线。4周后处死裸鼠，切取瘤组织及颈部淋巴结，HE染色及免疫组化染色法检测肿瘤病理学变化和肿瘤转移，增殖相关蛋白表达。镗里：日木1．成功获得稳定表达的阳性克隆转染细胞系CXCLl2．KDEL-plRES2．EGFP．Tb3．1及plRES2．EGFP．Tb3．I。电转染CXCLl2．KDEL．plRES2．EGFP及空质粒plRES2．EGFP真核表达载体至人口腔鳞癌细胞系Tb3．1，G418抗性筛选及单细胞克隆扩增，获得稳定表达的阳性克隆转染细胞系CXCLl2．KDEL．plRES2．EGFP．Tb3．1、plRES2．EGFP．Tb3．1。2．荷瘤模型的建立3组裸鼠以5×105个癌细胞接种后，7日后成瘤。4周后取瘤，测量肿瘤体积，组间有显著性差异(氏O．05)。HE染色示CXCLl2．KDEL．plRES2．EGFP组10只裸鼠无淋巴结转移；plRES2．EGFP组及未转染组分别有8只、9只出现淋巴结转移，差异有统计学意义(氏0．05)。3．肿瘤组织病理学改变及肿瘤转移、增殖相关蛋白表达天津医科人学硕十学位论文Cox．2蛋白在实验组、空载体组及未转染组的表达率分别为70％(21／30)、90％(36／40)、87．88％(29／33)，Cox一2在实验组的阳性表达低于后两组(氏O．05)；空载体组与未转染组Cox．2的表达无显著性差异(尸0．05)。Bcl一2蛋白在实验组、空载体组及未转染组的表达率分别为50％(8／16)、84(21／25)、85．71％(18／21)，Bcl．2在实验组的阳性表达低于后两组(PO．05)；空载体组与未转染组Bcl．2的表达无显著性差异(尸O．05)。VEGF．C蛋白在实验组、空载体组及未转染组的表达率分别为54．55％(12／22)、85．20％(23／27)、83．16％(16／19)，VEGF．C在实验组的阳性表达低于后两组(尸O．05)；空载体组与未转染组VEGF．C的表达无显著性差异(尸O．05)。结论融合基因CXCLl2．KDEL可胞内捕获CXCR4，阻断CXCLl2一CXCR4生物轴，从而抑制肿瘤细胞的增殖及淋巴结的转移。CXCR4可作为抑制头颈部肿瘤转移的有效靶点。关键词：CXCR4．融合基因：免疫组织化学：淋巴结转移，口腔鳞癌II天津医科人学硕十学位论文AbstractObjectivesTostudytheeffectsofCXCLl2-KDELfusiongeneonthegrowthandlymphmetastasisoftheimplantedcarcinomainnudemiceaftertransfectedintohumanoralsqumaouscarcinomacell(OSCC)lineTb3．1．ToexplorethecapturingeffectofCXCLl2一KDELfusiongenetoCXCR4．TofindoutaeffectivetherapytargetrestrainingtheproliferationandmetastasisandmakeainitialapprochoftargettherapyofOSCC．MethodsCXCLl2·-KDEL-plRES2一EGFPfusiongeneandeukaryoticvectorplRES2-EGFPwereelectrictransfectedintoTb3．1cellline．AfterG418selectionandsinglecellcloneproliferation，weobteinedstabletransfectedcelllineCXCLl2-KDEL—plRES2一EGFP—Tb3．1andplRES2-EGFP—Tb3．1．Establishthetongue